Untersuchungen zu Nitrat-induzierbaren Proteinen der Plasmamembran von Chlorella saccharophila (Krüger) Nadson
Die Aufnahme von Nitrat als wichtigste Stickstoffquelle der meisten Pflanzen erfolgt durch konstitutive und induzierbare Nitrat-Transportsysteme in der Plasmamembran (PM). Während auf molekulargenetischer Ebene Nitrat-Transporter codierende Gene eingehend untersucht sind, sind die Kenntnisse über die eigentlichen, die Transportsysteme konstituierenden Proteine sehr begrenzt. Dies gilt auch für weitere Plasmamembran-Proteine, die ebenfalls durch Nitrat induzierbar sind. Aus der einzelligen Grünalge Chlorella saccharophila als Modellsystem für niedere Pflanzen sollten Nitrat-Transporter und weitere Nitrat-induzierbare Proteine der Plasmamembran aufgereinigt und charakterisiert werden. Dazu wurden Verfahren etabliert zur Isolierung und Auftrennung der PM-Proteine nach Hydrophobizitätseigenschaften und ihrer anschließenden zweidimensionalen Gelelektrophorese. Basierend darauf wurden durch in vivo-Markierung mit 35S-Methionin, Photoaffinitätsmarkierung mit einem 14C-markierten Nitrat-Analogon und immunologische Nachweise (Western Blot) Nitrat-induzierte PM-Proteine isoliert, teilweise ansequenziert und charakterisiert. Nach RT-PCR einer mit Nitrat-induzierten Transkripten angereicherten mRNA wurde eine PCR mit degenerierten Primern durchgeführt und amplifizierte Fragmente ebenfalls ansequenziert.
570 Biowissenschaften, Biologie, Biologie, Plasmamembran, Nitrat-Transportsystem, Nitrat-Transporter, Zweidimensionale Gelelektrophorese, plasma membrane, nitrate transport system, nitrate transporter, two-dimensional gel electrophoresis, 42.15, 42.17, 42.43, WA, WV
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