ApolipoproteinE-Sendai (Arg 145 ->Pro) : Expression, Reinigung und Charakterisierung einer Apolipoprotein E-Variante, die mit der Lipoprotein-Glomerulopathie assoziiert ist
Varianten des Apolipoprotein E(ApoE)sind in Zusammenhang mit der Lipoprotein-Glomerulopathie aufgetreten, einer neuen Nierenerkrankung, bei der es zur Ablagerung von Lipoproteinen in glomerulären Kapillaren kommt. Ein Drittel der betroffenen Patienten sind heterozygot für ApoE-Sendai(Arg145->Pro). ApoE-Varianten können ebenfalls eine Hyperlipoproteinämie(HLP)Typ III hervorrufen. Die rezessive Form der Typ III HLP wird durch ApoE2(Arg158->Cys) hervorgerufen, einer Mutante mit verminderter Bindung an den Low-Density Lipoprotein(LDL)-Rezeptor aber mit fast normaler Heparinbindung. Die dominante Form der HLP Typ III hingegen wird durch Mutanten mit stark verminderter Heparinbindung aber erhaltener Bindung an den LDL-Rezeptor hervorgerufen. Ziel der vorliegenden Arbeit war es, ApoE-Sendai funktionell zu charakterisieren und anderen die HLP Typ III verursachenden ApoE-Varianten gegenüberzustellen. Zu diesem Zweck wurden ApoE2, ApoE3, ApoE1(Arg146->Glu), eine dominante Variante, und ApoE2-Sendai im Baculovirus-System exprimiert und über verschiedene chromatographische Verfahren gereinigt. Die Bindung an den LDL-Rezeptor wurde mittels der Komplexierung von rekombinantem ApoE an Phospholipid-Vesikel und an Very-Low Density Lipoproteine eines Patienten mit familiärem ApoE-Mangel untersucht. Verglichen mit ApoE3 zeigten ApoE2, ApoE1 und ApoE-Sendai eine LDL-Rezeptorbindung von weniger als 5 Die Heparinbindung betrug 53, 23 und 66 im Vergleich zu ApoE3. ApoE-Sendai ist somit die einzige bekannte Mutante innerhalb der Heparinbindungsdomäne des ApoE (Aminosäuren 142-147), welche eine verminderte Rezeptorbindung bei fast normaler Heparinbindung aufweist. Diese Eigenschaften des ApoE-Sendai könnten in Zusammenhang zur Lipoprotein-Glomerulopathie stehen.
Bindungsstudien, LDL-Rezeptor, apolipoprotein E, glomerulopathy, heterologous gene expression, purification procedures, LDL-receptor binding studies
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