{"id":{"repo_id":"freiburg-diss","oai_identifier":"oai:freidok.uni-freiburg.de:536"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/freiburg-diss/oai:freidok.uni-freiburg.de:536","repository":{"repo_id":"freiburg-diss","name":"University of Freiburg","base_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/oai/oai2.php"},"display":{"title":"Charakterisierung humoraler und zellulärer Immunantworten gegen das Hepatitis-B-Virus X-Antigen mittels DNA-Immunisierung im Mausmodell","abstract":"In der vorliegenden Arbeit wurde die Immunogenität des Hepatitis-B X-Antigens im murinen System mit der Methode der intramuskulären DNA-Vakzinierung im Hinblick auf die Entwicklung einer effizienten Immuntherapie der chronischen HBV-Infektion sowie des HBV-induzierten HCCs untersucht. Das X-Antigen spielt wahrscheinlich über Interaktionen eine wichtige Rolle bei der Etablierung der chronischen HBV-Infektion und der HCC-Genese. Im Serum HBV-infizierter Patienten wurden bereits einzelne Epitope des X-Antigens auf humoraler und T-Helferzell-Ebene in verschiedenen Studien charakterisiert. Zunächst wurden HBx-Expressionsplasmide der beiden HBV-Subtypen ayw und adw kloniert und die entsprechenden Antigene in eukaryontischen Zellen exprimiert. Um eine effiziente MHC-Klasse-I Präsentation des X-Antigens zu erreichen, wurden HBx-spezifische Vakzinia-Viren rekombiniert und selektioniert. Die Expression der rekombinanten Vektoren wurde in murinen Zellinien getestet. C57BL/6 und Balb/c Mäuse wurden mit den HBx-Expressionsvektoren sowie adjuvant mit den Zytokin-Vektoren IL-12 und IL-18 immunisiert. Die Antikörper-Analyse immunisierter Mäuse zeigte eine präferentielle Induktion von HBx-spezifischen Antikörpern in Balb/c Mäusen mit leicht erhöhter Serokonversionsrate bei Ko-Administration von IL-12- und IL-18. Bei Balb/c Mäusen wurden überwiegend schwache T-Helferzellantworten nach Immunisierung mit dem ayw-Subtyp beobachtet. Insgesamt konnte die parallele Induktion einer signifikanten Antikörperantwort und einer T-Helferzellantwort bei Balb/c Mäusen demonstriert werden. Der Nachweis einer signifikanten CD8+ zytotoxischen T-Zellantwort gegen Epitope beider Subtypen ist weder in Balb/c noch in C57BL/6 Mäusen mit der Methode der intramuskulären DNA-Immunisierung gelungen. Mit der Herstellung rekombinanter Vakzinia-Viren und der Klonierung von Expressionsvektoren der beiden X-Antigene liefert diese Arbeit wichtige Grundlagen für zukünftige immunologische Studien mit dem X-Antigen.","abstract_html":"In der vorliegenden Arbeit wurde die Immunogenität des Hepatitis-B X-Antigens im murinen System mit der Methode der intramuskulären DNA-Vakzinierung im Hinblick auf die Entwicklung einer effizienten Immuntherapie der chronischen HBV-Infektion sowie des HBV-induzierten HCCs untersucht. Das X-Antigen spielt wahrscheinlich über Interaktionen eine wichtige Rolle bei der Etablierung der chronischen HBV-Infektion und der HCC-Genese. Im Serum HBV-infizierter Patienten wurden bereits einzelne Epitope des X-Antigens auf humoraler und T-Helferzell-Ebene in verschiedenen Studien charakterisiert. Zunächst wurden HBx-Expressionsplasmide der beiden HBV-Subtypen ayw und adw kloniert und die entsprechenden Antigene in eukaryontischen Zellen exprimiert. Um eine effiziente MHC-Klasse-I Präsentation des X-Antigens zu erreichen, wurden HBx-spezifische Vakzinia-Viren rekombiniert und selektioniert. Die Expression der rekombinanten Vektoren wurde in murinen Zellinien getestet. C57BL/6 und Balb/c Mäuse wurden mit den HBx-Expressionsvektoren sowie adjuvant mit den Zytokin-Vektoren IL-12 und IL-18 immunisiert. 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Mit der Herstellung rekombinanter Vakzinia-Viren und der Klonierung von Expressionsvektoren der beiden X-Antigene liefert diese Arbeit wichtige Grundlagen für zukünftige immunologische Studien mit dem X-Antigen.","The aim of this study was to analyze immune responses against the hepatitis B virus X-antigen (HBX) with DNA vaccines in order to advance the development of an efficient immunotherapy against chronic hepatitis B infection and HBV induced hepatocellular carcinoma (HCC). X-antigen functions most likely via multiple interactions in the establishment of chronic HBV infection and tumor transformation to HCC. Several antibody and CD4+ T-cell specific epitopes of HBX have been identified in chronically infected patients. First we cloned plasmids for the expression of HBX of both virus subtypes (ayw, adw). Expression was tested in eukaryotic cells. For the efficient HLA class I presentation of HBX we generated recombinant vaccinia virus of both subtypes. Virus induced expression was analyzed by western blotting in haplotyp syngenic murine cells (MC57G and D2 cells). C57BL/6 and balb/c mice were injected with HBX expression plasmids and co-injected with expression vectors of cytokines IL-12 and IL-18. The measured antibody responses showed a preferential induction in balb/c mice. Ko-administration of IL-12 and IL-18 results in slight augmentation of the conversion rate. A weak the T-cell proliferation response was shown only in Balb/c mice. Overall the parallel induction of a significant antibody and T-cell proliferation response in Balb/c mice was demonstrated. No cytotoxic T-cell responses were observed in both haplotyps Balb/c and C57BL/6 after DNA-vaccination with both subtype antigens. 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Mit der Herstellung rekombinanter Vakzinia-Viren und der Klonierung von Expressionsvektoren der beiden X-Antigene liefert diese Arbeit wichtige Grundlagen für zukünftige immunologische Studien mit dem X-Antigen.","The aim of this study was to analyze immune responses against the hepatitis B virus X-antigen (HBX) with DNA vaccines in order to advance the development of an efficient immunotherapy against chronic hepatitis B infection and HBV induced hepatocellular carcinoma (HCC). X-antigen functions most likely via multiple interactions in the establishment of chronic HBV infection and tumor transformation to HCC. Several antibody and CD4+ T-cell specific epitopes of HBX have been identified in chronically infected patients. First we cloned plasmids for the expression of HBX of both virus subtypes (ayw, adw). Expression was tested in eukaryotic cells. For the efficient HLA class I presentation of HBX we generated recombinant vaccinia virus of both subtypes. 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