Identifizierung differentiell exprimierter Gene mit potentiellem Einfluß auf die Entwicklung transitionaler B-Zellen zu reifen B-Zellen der Milz

In adulten Säugetieren findet die frühe Phase der B-Zell-Entwicklung im Knochenmark statt. Anschließend verlassen die sogenannten transitionalen T1 B-Zellen das Knochenmark und entwickeln sich in der Milz weiter zu reifen B-Zellen, welche im Organismus rezirkulieren und als naive B-Zellen potentiell an immunologischen Reaktion teilhaben können. Über die Anfärbung der Oberflächenmoleküle CD21, CD23 und IgM konnten die einzelnen B-Zell-Populationen mit einer Reinheit von 95 sortiert werden und die daraus isolierte mRNA für die Hybridisierung des Mikroarrays Mu11K von Affymetrix verwendet werden. Von den transkribierten Genen zeigen im Mikroarray-Vergleich etwa 110 Transkripte einen Expressionsunterschied zwischen T1 und reifen B-Zellen, die damit potentiell einen direkten oder indirekten Einfluß auf die B-Zell-Entwicklung haben können. Die Validierung einer Auswahl von differentiell exprimierten Genen mittels Echtzeit-PCR demonstriert, daß der Anteil an falsch-positiven Expressionsunterschieden im Mikroarray-Vergleich gering ist. <br>Unter den validierten Expressionsunterschieden befindet sich das Transkript für Reelin. Die Expressionsstudien zeigen, daß Reelin in den frühen B-Zell-Stadien des Knochenmarks und in T1 B-Zellen um mehr als zehnfach höher transkribiert vorliegt als in reifen B-Zellen. Die durchgeführten durchflußzytometrischen Untersuchungen der lymphatischen Organe der Reeler-Maus, die kein funktionsfähiges Reelin besitzt, sprechen für einen Einfluß Reelins auf die B-Zell-Entwicklung im Knochenmark, welcher allerdings nicht immer phänotypisch ausgeprägt ist. In einigen Mäusen sind die pro/prä- und unreifen B-Zellen stark reduziert, wohingegen die B-Zell-Entwicklung in der Milz unbeeinflußt ist und rezirkulierende reife B-Zellen vorhanden sind. Das Auftreten des variablen Phänotyps ist dabei unabhängig von Alter, Hintergrund und Allel der Reeler-Maus.

Author dc:creator

• Weber, Holger

Contributors dc:contributor

• Neuhaus, Gunther

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