{"id":{"repo_id":"freiburg-diss","oai_identifier":"oai:freidok.uni-freiburg.de:2476"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/freiburg-diss/oai:freidok.uni-freiburg.de:2476","repository":{"repo_id":"freiburg-diss","name":"University of Freiburg","base_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/oai/oai2.php"},"display":{"title":"Die Bedeutung von Granzym A, B, K und Perforin bei gesunden Personen und in der Pathogenese chronischer Lungenerkrankungen","abstract":"Granzyme sind Serinproteasen, die in Vesikeln zytotoxischer Lymphozyten gespeichert werden. Durch ihre Fähigkeit zum Schneiden intra- wie extrazellulärer Substrate und zur Induktion von Apoptose sind sie gemeinsam mit Perforin bei der Abwehr von Infektionen, Tumorzellen, transplantiertem Fremdgewebe und bei Autoimmunerkrankungen bedeutsam. Bisher sind beim Menschen fünf Granzyme charakterisiert worden. Während über Granzym A und B bereits viel geforscht wurde, ist über Granzym H, K und M erst sehr wenig bekannt.
In dieser Arbeit wird die Generierung monoklonaler Antikörper gegen Granzym B und erstmalig Granzym K durch genetische Immunisierung beschrieben. Die Antikörper reagierten spezifisch mit ihrem Antigen und zeigten keine Kreuzreaktivität gegenüber den anderen Granzymen. Mittels FACS wurde die Verteilung von Granzym K mit der von Granzym A und B und mit Perforin verglichen. Frisch isolierte periphere Blutlymphozyten gesunder Personen enthielten gleich viel Granzym K wie Granzym B (12,4 % vs. 12,7 %). Perforin wurde von 17,3 %, Granzym A sogar von 29,2 % der Lymphozyten exprimiert. Bei einigen Personen konnten bright- und dim-Populationen unterschieden werden. Granzym K wurde wie auch die übrigen zytotoxischen Proteine von CD3+, CD4+, CD8+ und CD56+ Zellen gespeichert. Es wurde hauptsächlich von Lymphozyten der T-Zell-Linie exprimiert im Gegensatz zu Perforin und Granzym B, die eher in CD3- Zellen enthalten waren. Die Verteilung von Granzym A erschien ausgeglichener. Überraschenderweise speicherten die stark zytotoxischen CD3-CD56+ NK-Zellen zwar zu 78-93 % Granzym A, B und Perforin, jedoch nur zu 25 % Granzym K. Letzteres wurde dagegen bevorzugt von CD3+CD56+ NK-T-Zellen exprimiert. Granzym B zeigte generell zu Granzym K ein fast gegensätzliches Expressionsmuster. Nur 3,4 % der Lymphozyten enthielten gleichzeitig Granzym B und K.
Granzyme sind in der menschlichen Lunge besonders interessant, da dort ihre hauptsächlichen Inhibitoren inaktiv sind. Diese Arbeit detektierte Granzym K erstmals in BAL verschiedener Lungenerkrankungen. BAL-Lymphozyten von Patienten mit Pneumonie, Fibrose und Sarkoidose ließen unterschiedliche Expressionsmuster der zytotoxischen Proteine erkennen. Weiterhin konnte Granzym K erstmals immunhistochemisch im peripheren Lungengewebe und in Zellen mit direktem Kontakt zu Tumorgewebe nachgewiesen werden.
Zusammenfassung: Die vorliegende Arbeit zeigt, dass Granzym K in Lymphozyten des peripheren Blutes enthalten ist und dass es im Vergleich zu anderen zytotoxischen Proteinen ein eigenes Verteilungsmuster aufweist. Granzym K wird erstmals in BAL-Lymphozyten bei chronischen Lungenerkrankungen und in Tumor-infiltrierenden Lymphozyten nachgewiesen.","abstract_html":"Granzyme sind Serinproteasen, die in Vesikeln zytotoxischer Lymphozyten gespeichert werden. Durch ihre Fähigkeit zum Schneiden intra- wie extrazellulärer Substrate und zur Induktion von Apoptose sind sie gemeinsam mit Perforin bei der Abwehr von Infektionen, Tumorzellen, transplantiertem Fremdgewebe und bei Autoimmunerkrankungen bedeutsam. Bisher sind beim Menschen fünf Granzyme charakterisiert worden. Während über Granzym A und B bereits viel geforscht wurde, ist über Granzym H, K und M erst sehr wenig bekannt. <br>In dieser Arbeit wird die Generierung monoklonaler Antikörper gegen Granzym B und erstmalig Granzym K durch genetische Immunisierung beschrieben. Die Antikörper reagierten spezifisch mit ihrem Antigen und zeigten keine Kreuzreaktivität gegenüber den anderen Granzymen. Mittels FACS wurde die Verteilung von Granzym K mit der von Granzym A und B und mit Perforin verglichen. Frisch isolierte periphere Blutlymphozyten gesunder Personen enthielten gleich viel Granzym K wie Granzym B (12,4 % vs. 12,7 %). Perforin wurde von 17,3 %, Granzym A sogar von 29,2 % der Lymphozyten exprimiert. Bei einigen Personen konnten bright- und dim-Populationen unterschieden werden. Granzym K wurde wie auch die übrigen zytotoxischen Proteine von CD3+, CD4+, CD8+ und CD56+ Zellen gespeichert. Es wurde hauptsächlich von Lymphozyten der T-Zell-Linie exprimiert im Gegensatz zu Perforin und Granzym B, die eher in CD3- Zellen enthalten waren. Die Verteilung von Granzym A erschien ausgeglichener. Überraschenderweise speicherten die stark zytotoxischen CD3-CD56+ NK-Zellen zwar zu 78-93 % Granzym A, B und Perforin, jedoch nur zu 25 % Granzym K. Letzteres wurde dagegen bevorzugt von CD3+CD56+ NK-T-Zellen exprimiert. Granzym B zeigte generell zu Granzym K ein fast gegensätzliches Expressionsmuster. Nur 3,4 % der Lymphozyten enthielten gleichzeitig Granzym B und K. <br>Granzyme sind in der menschlichen Lunge besonders interessant, da dort ihre hauptsächlichen Inhibitoren inaktiv sind. Diese Arbeit detektierte Granzym K erstmals in BAL verschiedener Lungenerkrankungen. BAL-Lymphozyten von Patienten mit Pneumonie, Fibrose und Sarkoidose ließen unterschiedliche Expressionsmuster der zytotoxischen Proteine erkennen. Weiterhin konnte Granzym K erstmals immunhistochemisch im peripheren Lungengewebe und in Zellen mit direktem Kontakt zu Tumorgewebe nachgewiesen werden. <br>Zusammenfassung: Die vorliegende Arbeit zeigt, dass Granzym K in Lymphozyten des peripheren Blutes enthalten ist und dass es im Vergleich zu anderen zytotoxischen Proteinen ein eigenes Verteilungsmuster aufweist. Granzym K wird erstmals in BAL-Lymphozyten bei chronischen Lungenerkrankungen und in Tumor-infiltrierenden Lymphozyten nachgewiesen.","abstract_has_math":false,"creators":["Boettcher, Heidrun Elise"],"institution":null,"degree_name":null,"degree_level":null,"degree_discipline":null,"degree_department":null,"school":null,"contributors":["Luttmann, Werner"],"advisors":[],"committee_chairs":[],"committee_members":[],"year":null,"date_issued":"","date_published":null,"updated_at":"2026-07-24T02:22:46Z","subjects":["granzym","perforin","monoclonal antibody","CTL","granzyme","flow cytometry","lung"],"languages":[],"rights":[],"rights_urls":[],"identifier_entries":[]},"links":{"outbound_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/data/2476","outbound_label":"Repository record","outbound_source":"source_url"},"metadata_groups":[{"id":"people","label":"People","entries":[{"key":"dc:contributor","label":"Contributor","values":["Luttmann, Werner"]},{"key":"dc:creator","label":"Author","values":["Boettcher, Heidrun Elise"]}]},{"id":"academic_context","label":"Academic Context","entries":[{"key":"dc:type","label":"Dc Type","values":["DoctoralThesis"]}]},{"id":"subjects_keywords","label":"Subjects and Keywords","entries":[{"key":"dc:subject","label":"Dc Subject","values":["granzym","perforin","monoclonal antibody","CTL","granzyme","flow cytometry","lung"]}]},{"id":"additional","label":"Additional Metadata","entries":[{"key":"dc:description.abstract","label":"Abstract","values":["Granzyme sind Serinproteasen, die in Vesikeln zytotoxischer Lymphozyten gespeichert werden. Durch ihre Fähigkeit zum Schneiden intra- wie extrazellulärer Substrate und zur Induktion von Apoptose sind sie gemeinsam mit Perforin bei der Abwehr von Infektionen, Tumorzellen, transplantiertem Fremdgewebe und bei Autoimmunerkrankungen bedeutsam. Bisher sind beim Menschen fünf Granzyme charakterisiert worden. Während über Granzym A und B bereits viel geforscht wurde, ist über Granzym H, K und M erst sehr wenig bekannt.
In dieser Arbeit wird die Generierung monoklonaler Antikörper gegen Granzym B und erstmalig Granzym K durch genetische Immunisierung beschrieben. Die Antikörper reagierten spezifisch mit ihrem Antigen und zeigten keine Kreuzreaktivität gegenüber den anderen Granzymen. Mittels FACS wurde die Verteilung von Granzym K mit der von Granzym A und B und mit Perforin verglichen. Frisch isolierte periphere Blutlymphozyten gesunder Personen enthielten gleich viel Granzym K wie Granzym B (12,4 % vs. 12,7 %). Perforin wurde von 17,3 %, Granzym A sogar von 29,2 % der Lymphozyten exprimiert. Bei einigen Personen konnten bright- und dim-Populationen unterschieden werden. Granzym K wurde wie auch die übrigen zytotoxischen Proteine von CD3+, CD4+, CD8+ und CD56+ Zellen gespeichert. Es wurde hauptsächlich von Lymphozyten der T-Zell-Linie exprimiert im Gegensatz zu Perforin und Granzym B, die eher in CD3- Zellen enthalten waren. Die Verteilung von Granzym A erschien ausgeglichener. Überraschenderweise speicherten die stark zytotoxischen CD3-CD56+ NK-Zellen zwar zu 78-93 % Granzym A, B und Perforin, jedoch nur zu 25 % Granzym K. Letzteres wurde dagegen bevorzugt von CD3+CD56+ NK-T-Zellen exprimiert. Granzym B zeigte generell zu Granzym K ein fast gegensätzliches Expressionsmuster. Nur 3,4 % der Lymphozyten enthielten gleichzeitig Granzym B und K.
Granzyme sind in der menschlichen Lunge besonders interessant, da dort ihre hauptsächlichen Inhibitoren inaktiv sind. Diese Arbeit detektierte Granzym K erstmals in BAL verschiedener Lungenerkrankungen. BAL-Lymphozyten von Patienten mit Pneumonie, Fibrose und Sarkoidose ließen unterschiedliche Expressionsmuster der zytotoxischen Proteine erkennen. Weiterhin konnte Granzym K erstmals immunhistochemisch im peripheren Lungengewebe und in Zellen mit direktem Kontakt zu Tumorgewebe nachgewiesen werden.
Zusammenfassung: Die vorliegende Arbeit zeigt, dass Granzym K in Lymphozyten des peripheren Blutes enthalten ist und dass es im Vergleich zu anderen zytotoxischen Proteinen ein eigenes Verteilungsmuster aufweist. Granzym K wird erstmals in BAL-Lymphozyten bei chronischen Lungenerkrankungen und in Tumor-infiltrierenden Lymphozyten nachgewiesen.","Granzymes (Gzm) are serine proteases which are stored in the granules of cytotoxic lymphocytes. Due to their ability to cut intra- and extracellular substrates and to induce apoptosis they are together with the lytic protein perforin important for rejection of infections, tumor cells and transplanted grafts, and for autoimmune disorders. In humans, five granzymes have been characterized to date at the molecular level. While GzmA and GzmB have been extensively studied, little is known about GzmH, GzmK and GzmM.
This study describes the generation of monoclonal antibodies against human GzmB and, for the first time, against GzmK by genetic immunization. The obtained antibodies reacted specifically with their antigene and showed no cross-reactivity with other granzymes. Using FACS analysis the expression of GzmK was compared with that of other granzymes (GzmA and GzmB) and with perforin. Freshly isolated peripheral blood lymphocytes of healthy persons contained equal percentages of GzmK and GzmB (12,4 % vs. 12,7 %). Perforin was observed in 17,3 % of the lymphocytes, GzmA even in 29,2 %. In some cases it was possible to distinguish bright- and dim- populations. GzmK was, like the other cytotoxic proteins, stored in CD3+, CD4+, CD8+ und CD56+ cells. It was preferentially expressed in lymphocytes of the T cell lineage in contrast to perforin and GzmB, which were more often observed in CD3- cells. The distribution of GzmA was more balanced. Surprisingly, the highly cytotoxic CD3-CD56+ NK-cells contained in 78-93 % GzmA, GzmB and perforin, but only in 25 % GzmK. However, GzmK was stored mainly in CD3+CD56+ NK-T-cells. In general, GzmK and GzmB showed nearly an opposite pattern of expression. Only 3,4 % of the lymphocytes were double stained for GzmK and GzmB.
In the human lung, the main inhibitors of the granzymes are inactive which makes them particularly interesting. In this study, for the first time GzmK was detected in BAL of several lung pathologies. BAL-lymphocytes of patients with pneumonia, fibrosis and sarcoidosis revealed different patterns of expression of the cytotoxic proteins. Furthermore, a histological staining procedure was developed that demonstrated GzmK for the first time in peripheral lung tissue and in cells with direct contact to tumor tissue.
Conclusion: These studies demonstrate that GzmK, in comparison to other cytotoxic proteins, reveals a special pattern of distribution in distinct sub-populations of peripheral blood lymphocytes. For the first time, GzmK is detected in BAL-lymphocytes of chronic lung diseases and in tumor-infiltrating lymphocytes."]},{"key":"dc:format.medium","label":"Dc Format Medium","values":["application/pdf"]},{"key":"dc:title","label":"Title","values":["Die Bedeutung von Granzym A, B, K und Perforin bei gesunden Personen und in der Pathogenese chronischer Lungenerkrankungen","The meaning of granzyme A, B, K and perforin in healthy persons and in the pathogenesis of chronic lung diseases"]}]}],"canonical_facts":{"dc:contributor":["Luttmann, Werner"],"dc:creator":["Boettcher, Heidrun Elise"],"dc:description.abstract":["Granzyme sind Serinproteasen, die in Vesikeln zytotoxischer Lymphozyten gespeichert werden. Durch ihre Fähigkeit zum Schneiden intra- wie extrazellulärer Substrate und zur Induktion von Apoptose sind sie gemeinsam mit Perforin bei der Abwehr von Infektionen, Tumorzellen, transplantiertem Fremdgewebe und bei Autoimmunerkrankungen bedeutsam. Bisher sind beim Menschen fünf Granzyme charakterisiert worden. Während über Granzym A und B bereits viel geforscht wurde, ist über Granzym H, K und M erst sehr wenig bekannt.
In dieser Arbeit wird die Generierung monoklonaler Antikörper gegen Granzym B und erstmalig Granzym K durch genetische Immunisierung beschrieben. Die Antikörper reagierten spezifisch mit ihrem Antigen und zeigten keine Kreuzreaktivität gegenüber den anderen Granzymen. Mittels FACS wurde die Verteilung von Granzym K mit der von Granzym A und B und mit Perforin verglichen. Frisch isolierte periphere Blutlymphozyten gesunder Personen enthielten gleich viel Granzym K wie Granzym B (12,4 % vs. 12,7 %). Perforin wurde von 17,3 %, Granzym A sogar von 29,2 % der Lymphozyten exprimiert. Bei einigen Personen konnten bright- und dim-Populationen unterschieden werden. Granzym K wurde wie auch die übrigen zytotoxischen Proteine von CD3+, CD4+, CD8+ und CD56+ Zellen gespeichert. Es wurde hauptsächlich von Lymphozyten der T-Zell-Linie exprimiert im Gegensatz zu Perforin und Granzym B, die eher in CD3- Zellen enthalten waren. Die Verteilung von Granzym A erschien ausgeglichener. Überraschenderweise speicherten die stark zytotoxischen CD3-CD56+ NK-Zellen zwar zu 78-93 % Granzym A, B und Perforin, jedoch nur zu 25 % Granzym K. Letzteres wurde dagegen bevorzugt von CD3+CD56+ NK-T-Zellen exprimiert. Granzym B zeigte generell zu Granzym K ein fast gegensätzliches Expressionsmuster. Nur 3,4 % der Lymphozyten enthielten gleichzeitig Granzym B und K.
Granzyme sind in der menschlichen Lunge besonders interessant, da dort ihre hauptsächlichen Inhibitoren inaktiv sind. Diese Arbeit detektierte Granzym K erstmals in BAL verschiedener Lungenerkrankungen. BAL-Lymphozyten von Patienten mit Pneumonie, Fibrose und Sarkoidose ließen unterschiedliche Expressionsmuster der zytotoxischen Proteine erkennen. Weiterhin konnte Granzym K erstmals immunhistochemisch im peripheren Lungengewebe und in Zellen mit direktem Kontakt zu Tumorgewebe nachgewiesen werden.
Zusammenfassung: Die vorliegende Arbeit zeigt, dass Granzym K in Lymphozyten des peripheren Blutes enthalten ist und dass es im Vergleich zu anderen zytotoxischen Proteinen ein eigenes Verteilungsmuster aufweist. Granzym K wird erstmals in BAL-Lymphozyten bei chronischen Lungenerkrankungen und in Tumor-infiltrierenden Lymphozyten nachgewiesen.","Granzymes (Gzm) are serine proteases which are stored in the granules of cytotoxic lymphocytes. Due to their ability to cut intra- and extracellular substrates and to induce apoptosis they are together with the lytic protein perforin important for rejection of infections, tumor cells and transplanted grafts, and for autoimmune disorders. In humans, five granzymes have been characterized to date at the molecular level. While GzmA and GzmB have been extensively studied, little is known about GzmH, GzmK and GzmM.
This study describes the generation of monoclonal antibodies against human GzmB and, for the first time, against GzmK by genetic immunization. The obtained antibodies reacted specifically with their antigene and showed no cross-reactivity with other granzymes. Using FACS analysis the expression of GzmK was compared with that of other granzymes (GzmA and GzmB) and with perforin. Freshly isolated peripheral blood lymphocytes of healthy persons contained equal percentages of GzmK and GzmB (12,4 % vs. 12,7 %). Perforin was observed in 17,3 % of the lymphocytes, GzmA even in 29,2 %. In some cases it was possible to distinguish bright- and dim- populations. GzmK was, like the other cytotoxic proteins, stored in CD3+, CD4+, CD8+ und CD56+ cells. It was preferentially expressed in lymphocytes of the T cell lineage in contrast to perforin and GzmB, which were more often observed in CD3- cells. The distribution of GzmA was more balanced. Surprisingly, the highly cytotoxic CD3-CD56+ NK-cells contained in 78-93 % GzmA, GzmB and perforin, but only in 25 % GzmK. However, GzmK was stored mainly in CD3+CD56+ NK-T-cells. In general, GzmK and GzmB showed nearly an opposite pattern of expression. Only 3,4 % of the lymphocytes were double stained for GzmK and GzmB.
In the human lung, the main inhibitors of the granzymes are inactive which makes them particularly interesting. In this study, for the first time GzmK was detected in BAL of several lung pathologies. BAL-lymphocytes of patients with pneumonia, fibrosis and sarcoidosis revealed different patterns of expression of the cytotoxic proteins. Furthermore, a histological staining procedure was developed that demonstrated GzmK for the first time in peripheral lung tissue and in cells with direct contact to tumor tissue.
Conclusion: These studies demonstrate that GzmK, in comparison to other cytotoxic proteins, reveals a special pattern of distribution in distinct sub-populations of peripheral blood lymphocytes. For the first time, GzmK is detected in BAL-lymphocytes of chronic lung diseases and in tumor-infiltrating lymphocytes."],"dc:format.medium":["application/pdf"],"dc:subject":["granzym","perforin","monoclonal antibody","CTL","granzyme","flow cytometry","lung"],"dc:title":["Die Bedeutung von Granzym A, B, K und Perforin bei gesunden Personen und in der Pathogenese chronischer Lungenerkrankungen","The meaning of granzyme A, B, K and perforin in healthy persons and in the pathogenesis of chronic lung diseases"],"dc:type":["DoctoralThesis"]},"updated_at":"2026-07-24T02:22:46Z"}