{"id":{"repo_id":"freiburg-diss","oai_identifier":"oai:freidok.uni-freiburg.de:2466"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/freiburg-diss/oai:freidok.uni-freiburg.de:2466","repository":{"repo_id":"freiburg-diss","name":"University of Freiburg","base_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/oai/oai2.php"},"display":{"title":"Bifunktionale Fusionsproteine : Kombination hochselektiver, direkter FXa Inhibition mit aktivationsspezifischer GP IIb/IIIa Blockade einerseits, und zielgerichtetem Fibrin-Targeting andereseits","abstract":"Ziel dieser Arbeit war es mittels molekularbiologischer Methoden kleinstmögliche, antikoagulatorisch wirksame Fusionsproteine bestehend aus \"single-chain\" Antikörperfragmenten und einem potenten, direkten Faktor Xa Inhibitor herzustellen. <br> <br>Single-chain Antikörper sind über einen Linker zu einer \"Kette\" verbundene Immunglobulin-Derivate, die nur aus den variablen Regionen der schweren und leichten Kette bestehen. Das Tick Anticoagulant Peptide (TAP) ist ein neuartiger Serinprotease-Inhibitor, der sehr effektiv und hochselektiv den Faktor Xa hemmt. In der vorliegenden Arbeit wurde das aus 60 Aminosäuren bestehende Protein an zwei verschiedene single-chain Antikörper fusioniert: 1) an den fibrinspezifischen scFv59d8 2) an den für aktivierte Thrombozyten spezifischen scFvMA2. Die entsprechenden DNA-Stücke wurden mittels der Polymerasekettenreaktion (PCR) fusioniert, in den Vector pHog21 ligiert und in TG1 E. coli exprimiert. Die Hauptschwierigkeit der vorliegenden Promotionsarbeit war die Expression eines korrekt gefalteten Proteins. Eine Optimierung der Proteinexpression und -aufreinigung war nur durch eine Vielzahl systematischer methodischer Untersuchungen möglich. <br> <br>Das Konstrukt scFv59d8-TAP reichert sich lokal am fibrinreichen venösen Thrombus an. Die Fibrinspezifität erlaubt eine hohe TAP Konzentration am Thrombus und somit eine potente Faktor Xa Inhibition auf der Oberfläche des Gerinnsels bei gleichzeitig systemisch niedrigen Konzentrationen an Fusionsprotein. Wir konnten zeigen, dass sich scFv59d8-TAP tatsächlich am Thrombus anreichert und hierdurch zu einer hocheffektiven antikoagulativ wirksamen Substanz wird. <br> <br>Das Protein scFvMA2-TAP vereint gleichzeitig drei herausragende Qualitäten. Erstens blockiert es ausschließlich den aktivierten Zustand des GP IIb/IIIa Rezeptors der Thrombozyten. Zweitens bewirkt die TAP-Komponente des Konstruktes eine potente Faktor Xa Inhibition neben der effektiven Thrombozyteninhibition und drittens reichert sich das TAP genau dort an, wo die Konzentration an Prothrombinasekomplex am größten ist, nämlich unmittelbar auf der Plättchenoberfläche. <br> <br>In weiterführenden Arbeiten sollen nun die beschriebenen Vorteile der hergestellten Fusionsproteine in vivo überprüft werden. Die neu hergestellten Antikoagulativa versprechen eine hohe lokale Wirksamkeit bei reduziertem Blutungsrisiko.","abstract_html":"Ziel dieser Arbeit war es mittels molekularbiologischer Methoden kleinstmögliche, antikoagulatorisch wirksame Fusionsproteine bestehend aus &quot;single-chain&quot; Antikörperfragmenten und einem potenten, direkten Faktor Xa Inhibitor herzustellen. &lt;br&gt; &lt;br&gt;Single-chain Antikörper sind über einen Linker zu einer &quot;Kette&quot; verbundene Immunglobulin-Derivate, die nur aus den variablen Regionen der schweren und leichten Kette bestehen. Das Tick Anticoagulant Peptide (TAP) ist ein neuartiger Serinprotease-Inhibitor, der sehr effektiv und hochselektiv den Faktor Xa hemmt. In der vorliegenden Arbeit wurde das aus 60 Aminosäuren bestehende Protein an zwei verschiedene single-chain Antikörper fusioniert: 1) an den fibrinspezifischen scFv59d8 2) an den für aktivierte Thrombozyten spezifischen scFvMA2. Die entsprechenden DNA-Stücke wurden mittels der Polymerasekettenreaktion (PCR) fusioniert, in den Vector pHog21 ligiert und in TG1 E. coli exprimiert. Die Hauptschwierigkeit der vorliegenden Promotionsarbeit war die Expression eines korrekt gefalteten Proteins. Eine Optimierung der Proteinexpression und -aufreinigung war nur durch eine Vielzahl systematischer methodischer Untersuchungen möglich. &lt;br&gt; &lt;br&gt;Das Konstrukt scFv59d8-TAP reichert sich lokal am fibrinreichen venösen Thrombus an. Die Fibrinspezifität erlaubt eine hohe TAP Konzentration am Thrombus und somit eine potente Faktor Xa Inhibition auf der Oberfläche des Gerinnsels bei gleichzeitig systemisch niedrigen Konzentrationen an Fusionsprotein. Wir konnten zeigen, dass sich scFv59d8-TAP tatsächlich am Thrombus anreichert und hierdurch zu einer hocheffektiven antikoagulativ wirksamen Substanz wird. &lt;br&gt; &lt;br&gt;Das Protein scFvMA2-TAP vereint gleichzeitig drei herausragende Qualitäten. Erstens blockiert es ausschließlich den aktivierten Zustand des GP IIb/IIIa Rezeptors der Thrombozyten. Zweitens bewirkt die TAP-Komponente des Konstruktes eine potente Faktor Xa Inhibition neben der effektiven Thrombozyteninhibition und drittens reichert sich das TAP genau dort an, wo die Konzentration an Prothrombinasekomplex am größten ist, nämlich unmittelbar auf der Plättchenoberfläche. &lt;br&gt; &lt;br&gt;In weiterführenden Arbeiten sollen nun die beschriebenen Vorteile der hergestellten Fusionsproteine in vivo überprüft werden. Die neu hergestellten Antikoagulativa versprechen eine hohe lokale Wirksamkeit bei reduziertem Blutungsrisiko.","abstract_has_math":false,"creators":["Jaminet, Patrick"],"institution":null,"degree_name":null,"degree_level":null,"degree_discipline":null,"degree_department":null,"school":null,"contributors":["Peter, Karlheinz"],"advisors":[],"committee_chairs":[],"committee_members":[],"year":null,"date_issued":"","date_published":null,"updated_at":"2026-07-24T02:22:46Z","subjects":["GP IIb/IIIa Rezeptor","Factor Xa","Targeting","platelet, bifunctional"],"languages":[],"rights":[],"rights_urls":[],"identifier_entries":[]},"links":{"outbound_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/data/2466","outbound_label":"Repository record","outbound_source":"source_url"},"metadata_groups":[{"id":"people","label":"People","entries":[{"key":"dc:contributor","label":"Contributor","values":["Peter, Karlheinz"]},{"key":"dc:creator","label":"Author","values":["Jaminet, Patrick"]}]},{"id":"academic_context","label":"Academic Context","entries":[{"key":"dc:type","label":"Dc Type","values":["DoctoralThesis"]}]},{"id":"subjects_keywords","label":"Subjects and Keywords","entries":[{"key":"dc:subject","label":"Dc Subject","values":["GP IIb/IIIa Rezeptor","Factor Xa","Targeting","platelet, bifunctional"]}]},{"id":"additional","label":"Additional Metadata","entries":[{"key":"dc:description.abstract","label":"Abstract","values":["Ziel dieser Arbeit war es mittels molekularbiologischer Methoden kleinstmögliche, antikoagulatorisch wirksame Fusionsproteine bestehend aus \"single-chain\" Antikörperfragmenten und einem potenten, direkten Faktor Xa Inhibitor herzustellen. <br> <br>Single-chain Antikörper sind über einen Linker zu einer \"Kette\" verbundene Immunglobulin-Derivate, die nur aus den variablen Regionen der schweren und leichten Kette bestehen. Das Tick Anticoagulant Peptide (TAP) ist ein neuartiger Serinprotease-Inhibitor, der sehr effektiv und hochselektiv den Faktor Xa hemmt. In der vorliegenden Arbeit wurde das aus 60 Aminosäuren bestehende Protein an zwei verschiedene single-chain Antikörper fusioniert: 1) an den fibrinspezifischen scFv59d8 2) an den für aktivierte Thrombozyten spezifischen scFvMA2. Die entsprechenden DNA-Stücke wurden mittels der Polymerasekettenreaktion (PCR) fusioniert, in den Vector pHog21 ligiert und in TG1 E. coli exprimiert. Die Hauptschwierigkeit der vorliegenden Promotionsarbeit war die Expression eines korrekt gefalteten Proteins. Eine Optimierung der Proteinexpression und -aufreinigung war nur durch eine Vielzahl systematischer methodischer Untersuchungen möglich. <br> <br>Das Konstrukt scFv59d8-TAP reichert sich lokal am fibrinreichen venösen Thrombus an. Die Fibrinspezifität erlaubt eine hohe TAP Konzentration am Thrombus und somit eine potente Faktor Xa Inhibition auf der Oberfläche des Gerinnsels bei gleichzeitig systemisch niedrigen Konzentrationen an Fusionsprotein. Wir konnten zeigen, dass sich scFv59d8-TAP tatsächlich am Thrombus anreichert und hierdurch zu einer hocheffektiven antikoagulativ wirksamen Substanz wird. <br> <br>Das Protein scFvMA2-TAP vereint gleichzeitig drei herausragende Qualitäten. Erstens blockiert es ausschließlich den aktivierten Zustand des GP IIb/IIIa Rezeptors der Thrombozyten. Zweitens bewirkt die TAP-Komponente des Konstruktes eine potente Faktor Xa Inhibition neben der effektiven Thrombozyteninhibition und drittens reichert sich das TAP genau dort an, wo die Konzentration an Prothrombinasekomplex am größten ist, nämlich unmittelbar auf der Plättchenoberfläche. <br> <br>In weiterführenden Arbeiten sollen nun die beschriebenen Vorteile der hergestellten Fusionsproteine in vivo überprüft werden. Die neu hergestellten Antikoagulativa versprechen eine hohe lokale Wirksamkeit bei reduziertem Blutungsrisiko.","The main goal of this work was the construction of small anticoagulant fusionproteins consisting of a single-chain antibody and a direct factor Xa inhibitor, using recombinant technologies. <br> <br>TAP is serine protease inhibitor originally isolated from the tick Ornithodoros moubata. The recombinant form of TAP has been shown to have a strong specific and potent direct inhibition of factor Xa. In this work, TAP has been fused to two different single-chain antibodies: 1) the fibrin-specific scFv59d8 and 2) scFvMA2, specific against activated platelets. <br>The corresponding DNA fragments have been fused through PCR, ligated into the vector pHog21 and expressed in E. coli. <br> <br>The scFv59d8 reaches its highest concentration at the fibrin-rich venous clot. Thereby a potent inhibition of factor Xa is achieved at the clot surface with systemic low TAP concentrations. <br> <br>The scFvMA2 is a fusion protein that combines platelet targeting, platelet blockade (GP IIb/IIIa bblockade) and fXa inhibition. If studies in ex vivo flow chambers or animal models continue to show the promise of the in vitro observations, the presented recombinant scFvMA2-TAP is the prototype of a new generation of antithrombotics, providing effective anticoagulation and platelet blockade without systemic bleeding complications."]},{"key":"dc:format.medium","label":"Dc Format Medium","values":["application/pdf"]},{"key":"dc:title","label":"Title","values":["Bifunktionale Fusionsproteine : Kombination hochselektiver, direkter FXa Inhibition mit aktivationsspezifischer GP IIb/IIIa Blockade einerseits, und zielgerichtetem Fibrin-Targeting andereseits","Bifunctional fusion proteins : combination of highly specific direct factor Xa inhibition with activation-specific GP IIb/IIIa blockade and fibrin-targeting"]}]}],"canonical_facts":{"dc:contributor":["Peter, Karlheinz"],"dc:creator":["Jaminet, Patrick"],"dc:description.abstract":["Ziel dieser Arbeit war es mittels molekularbiologischer Methoden kleinstmögliche, antikoagulatorisch wirksame Fusionsproteine bestehend aus \"single-chain\" Antikörperfragmenten und einem potenten, direkten Faktor Xa Inhibitor herzustellen. <br> <br>Single-chain Antikörper sind über einen Linker zu einer \"Kette\" verbundene Immunglobulin-Derivate, die nur aus den variablen Regionen der schweren und leichten Kette bestehen. Das Tick Anticoagulant Peptide (TAP) ist ein neuartiger Serinprotease-Inhibitor, der sehr effektiv und hochselektiv den Faktor Xa hemmt. In der vorliegenden Arbeit wurde das aus 60 Aminosäuren bestehende Protein an zwei verschiedene single-chain Antikörper fusioniert: 1) an den fibrinspezifischen scFv59d8 2) an den für aktivierte Thrombozyten spezifischen scFvMA2. Die entsprechenden DNA-Stücke wurden mittels der Polymerasekettenreaktion (PCR) fusioniert, in den Vector pHog21 ligiert und in TG1 E. coli exprimiert. Die Hauptschwierigkeit der vorliegenden Promotionsarbeit war die Expression eines korrekt gefalteten Proteins. Eine Optimierung der Proteinexpression und -aufreinigung war nur durch eine Vielzahl systematischer methodischer Untersuchungen möglich. <br> <br>Das Konstrukt scFv59d8-TAP reichert sich lokal am fibrinreichen venösen Thrombus an. Die Fibrinspezifität erlaubt eine hohe TAP Konzentration am Thrombus und somit eine potente Faktor Xa Inhibition auf der Oberfläche des Gerinnsels bei gleichzeitig systemisch niedrigen Konzentrationen an Fusionsprotein. Wir konnten zeigen, dass sich scFv59d8-TAP tatsächlich am Thrombus anreichert und hierdurch zu einer hocheffektiven antikoagulativ wirksamen Substanz wird. <br> <br>Das Protein scFvMA2-TAP vereint gleichzeitig drei herausragende Qualitäten. Erstens blockiert es ausschließlich den aktivierten Zustand des GP IIb/IIIa Rezeptors der Thrombozyten. Zweitens bewirkt die TAP-Komponente des Konstruktes eine potente Faktor Xa Inhibition neben der effektiven Thrombozyteninhibition und drittens reichert sich das TAP genau dort an, wo die Konzentration an Prothrombinasekomplex am größten ist, nämlich unmittelbar auf der Plättchenoberfläche. <br> <br>In weiterführenden Arbeiten sollen nun die beschriebenen Vorteile der hergestellten Fusionsproteine in vivo überprüft werden. Die neu hergestellten Antikoagulativa versprechen eine hohe lokale Wirksamkeit bei reduziertem Blutungsrisiko.","The main goal of this work was the construction of small anticoagulant fusionproteins consisting of a single-chain antibody and a direct factor Xa inhibitor, using recombinant technologies. <br> <br>TAP is serine protease inhibitor originally isolated from the tick Ornithodoros moubata. The recombinant form of TAP has been shown to have a strong specific and potent direct inhibition of factor Xa. In this work, TAP has been fused to two different single-chain antibodies: 1) the fibrin-specific scFv59d8 and 2) scFvMA2, specific against activated platelets. <br>The corresponding DNA fragments have been fused through PCR, ligated into the vector pHog21 and expressed in E. coli. <br> <br>The scFv59d8 reaches its highest concentration at the fibrin-rich venous clot. Thereby a potent inhibition of factor Xa is achieved at the clot surface with systemic low TAP concentrations. <br> <br>The scFvMA2 is a fusion protein that combines platelet targeting, platelet blockade (GP IIb/IIIa bblockade) and fXa inhibition. If studies in ex vivo flow chambers or animal models continue to show the promise of the in vitro observations, the presented recombinant scFvMA2-TAP is the prototype of a new generation of antithrombotics, providing effective anticoagulation and platelet blockade without systemic bleeding complications."],"dc:format.medium":["application/pdf"],"dc:subject":["GP IIb/IIIa Rezeptor","Factor Xa","Targeting","platelet, bifunctional"],"dc:title":["Bifunktionale Fusionsproteine : Kombination hochselektiver, direkter FXa Inhibition mit aktivationsspezifischer GP IIb/IIIa Blockade einerseits, und zielgerichtetem Fibrin-Targeting andereseits","Bifunctional fusion proteins : combination of highly specific direct factor Xa inhibition with activation-specific GP IIb/IIIa blockade and fibrin-targeting"],"dc:type":["DoctoralThesis"]},"updated_at":"2026-07-24T02:22:46Z"}