{"id":{"repo_id":"freiburg-diss","oai_identifier":"oai:freidok.uni-freiburg.de:2333"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/freiburg-diss/oai:freidok.uni-freiburg.de:2333","repository":{"repo_id":"freiburg-diss","name":"University of Freiburg","base_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/oai/oai2.php"},"display":{"title":"Phänotypische und funktionelle Charakterisierung von CD4+CD25+ \"regulatorischen\" T-Zellen aus dem Nabelschnurblut","abstract":"Hintergrund: Um Risikofaktoren für die Entwicklung einer Allergischen Sensibilisierung zu identifizieren, ist es von nutzen die T-Zell-Funktion bei Neugeborenen zu untersuchen.
Ziel: Isolierung von CD4+CD25+ T-Zellen aus dem Nabelschnurblut, Proliferation und Zytokin-produktion dieser Zellen im Vergleich zu CBMC.
Methoden: Von 42 gesunden Neugeborenen wurde Nabelschnurblut entnommen. CBMC wurden mittels Dichtezentrifugation isoliert. Anschließend wurden die CD4+CD25+-Zellen mit unterschiedlichen Methoden isoliert. Die isolierten CD4+CD25+-Zellen und CBMC wurden jeweils mit IL2 (und Medium alleine als negativ Kontrolle) in Kultur gesetzt. Nach 7 Tagen wurde die Proliferation der Zellen mittels 3H-Thymidin/Szintillation gemesssen. Für die Zytokin-Analyse wurden CBMC oder CBMC/CD4+CD25+-Kokulturen mit Medium alleine oder PHA stimuliert. Die Überstände wurden nach 24h abgezogen und die Zytokine IFN-g, TGF-ß, IL10 und IL13 mittels ELISA gemessen.
Ergebnisse: Die CD4+CD25+ T-Zellen stellten einen mittleren Anteil von 4,6% der CBMC dar (Range 1,7-7,7).Sie zeigten nur eine geringe Proliferationsantwort auf Stimulation mit IL2 (Median SI 1,8) im Vergleich zu den CBMC (SI 5,4, p=0,005, Wilcoxon’s 2 sample test). Im Verlgeich zu den CBMC-Kulturen zeigten Kokulturen mit CD4+CD25+-Zellen eine erniedrigte IL10- (Median: CBMC: 174,6; CBMC / CD4+CD25+: 2,6 pg/ml; p=0,04) und IFN-g-Ausschüttung (223; 11,5 pg/ml; p=0,01) nach Stimulation mit PHA. Im Gegensatz dazu waren die Ausschüttungen von TGF-ß (103,7; 114,1 pg/ml, p=0,2) und IL13 (701,6; 351,5 pg/ml; p=0,3) nahezu identisch in beiden Zellpopulationen.
Zusammenfassung: wir konnten CD4+CD25+ T-Zellen aus dem Nabelschnurblut isolieren. Diese zeigten nur eine geringe Proliferationsantwort auf IL2. Ebenfalls ist die IL10 und IFN-g Konzentration, aber nicht die TGF-ß und IL13 Konzentration, in Kokulturen von CBMC und CD4+CD25+ Zellen nach PHA-Stimulation erniedrigt. Die genaue Rolle der CD4+CD25+ Zellen in der Entwicklung eines TH2-Pänotyps in Neonaten bleibt noch zu ermitteln.","abstract_html":"Hintergrund: Um Risikofaktoren für die Entwicklung einer Allergischen Sensibilisierung zu identifizieren, ist es von nutzen die T-Zell-Funktion bei Neugeborenen zu untersuchen. <br>Ziel: Isolierung von CD4+CD25+ T-Zellen aus dem Nabelschnurblut, Proliferation und Zytokin-produktion dieser Zellen im Vergleich zu CBMC. <br>Methoden: Von 42 gesunden Neugeborenen wurde Nabelschnurblut entnommen. CBMC wurden mittels Dichtezentrifugation isoliert. Anschließend wurden die CD4+CD25+-Zellen mit unterschiedlichen Methoden isoliert. Die isolierten CD4+CD25+-Zellen und CBMC wurden jeweils mit IL2 (und Medium alleine als negativ Kontrolle) in Kultur gesetzt. Nach 7 Tagen wurde die Proliferation der Zellen mittels 3H-Thymidin/Szintillation gemesssen. Für die Zytokin-Analyse wurden CBMC oder CBMC/CD4+CD25+-Kokulturen mit Medium alleine oder PHA stimuliert. Die Überstände wurden nach 24h abgezogen und die Zytokine IFN-g, TGF-ß, IL10 und IL13 mittels ELISA gemessen. <br>Ergebnisse: Die CD4+CD25+ T-Zellen stellten einen mittleren Anteil von 4,6% der CBMC dar (Range 1,7-7,7).Sie zeigten nur eine geringe Proliferationsantwort auf Stimulation mit IL2 (Median SI 1,8) im Vergleich zu den CBMC (SI 5,4, p=0,005, Wilcoxon’s 2 sample test). Im Verlgeich zu den CBMC-Kulturen zeigten Kokulturen mit CD4+CD25+-Zellen eine erniedrigte IL10- (Median: CBMC: 174,6; CBMC / CD4+CD25+: 2,6 pg/ml; p=0,04) und IFN-g-Ausschüttung (223; 11,5 pg/ml; p=0,01) nach Stimulation mit PHA. Im Gegensatz dazu waren die Ausschüttungen von TGF-ß (103,7; 114,1 pg/ml, p=0,2) und IL13 (701,6; 351,5 pg/ml; p=0,3) nahezu identisch in beiden Zellpopulationen. <br>Zusammenfassung: wir konnten CD4+CD25+ T-Zellen aus dem Nabelschnurblut isolieren. Diese zeigten nur eine geringe Proliferationsantwort auf IL2. Ebenfalls ist die IL10 und IFN-g Konzentration, aber nicht die TGF-ß und IL13 Konzentration, in Kokulturen von CBMC und CD4+CD25+ Zellen nach PHA-Stimulation erniedrigt. Die genaue Rolle der CD4+CD25+ Zellen in der Entwicklung eines TH2-Pänotyps in Neonaten bleibt noch zu ermitteln.","abstract_has_math":false,"creators":["Ngoumou, Gonza Balbina"],"institution":null,"degree_name":null,"degree_level":null,"degree_discipline":null,"degree_department":null,"school":null,"contributors":["Kopp, Matthias"],"advisors":[],"committee_chairs":[],"committee_members":[],"year":null,"date_issued":"","date_published":null,"updated_at":"2026-07-24T02:22:40Z","subjects":["CD4+CD25+","T-Zellen","Zytokin","Allergie","Regulatorische T-Zellen","T-cells","Cytokine","Allergy","Regulatory T-cells"],"languages":[],"rights":[],"rights_urls":[],"identifier_entries":[]},"links":{"outbound_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/data/2333","outbound_label":"Repository record","outbound_source":"source_url"},"metadata_groups":[{"id":"people","label":"People","entries":[{"key":"dc:contributor","label":"Contributor","values":["Kopp, Matthias"]},{"key":"dc:creator","label":"Author","values":["Ngoumou, Gonza Balbina"]}]},{"id":"academic_context","label":"Academic Context","entries":[{"key":"dc:type","label":"Dc Type","values":["DoctoralThesis"]}]},{"id":"subjects_keywords","label":"Subjects and Keywords","entries":[{"key":"dc:subject","label":"Dc Subject","values":["CD4+CD25+","T-Zellen","Zytokin","Allergie","Regulatorische T-Zellen","T-cells","Cytokine","Allergy","Regulatory T-cells"]}]},{"id":"additional","label":"Additional Metadata","entries":[{"key":"dc:description.abstract","label":"Abstract","values":["Hintergrund: Um Risikofaktoren für die Entwicklung einer Allergischen Sensibilisierung zu identifizieren, ist es von nutzen die T-Zell-Funktion bei Neugeborenen zu untersuchen.
Ziel: Isolierung von CD4+CD25+ T-Zellen aus dem Nabelschnurblut, Proliferation und Zytokin-produktion dieser Zellen im Vergleich zu CBMC.
Methoden: Von 42 gesunden Neugeborenen wurde Nabelschnurblut entnommen. CBMC wurden mittels Dichtezentrifugation isoliert. Anschließend wurden die CD4+CD25+-Zellen mit unterschiedlichen Methoden isoliert. Die isolierten CD4+CD25+-Zellen und CBMC wurden jeweils mit IL2 (und Medium alleine als negativ Kontrolle) in Kultur gesetzt. Nach 7 Tagen wurde die Proliferation der Zellen mittels 3H-Thymidin/Szintillation gemesssen. Für die Zytokin-Analyse wurden CBMC oder CBMC/CD4+CD25+-Kokulturen mit Medium alleine oder PHA stimuliert. Die Überstände wurden nach 24h abgezogen und die Zytokine IFN-g, TGF-ß, IL10 und IL13 mittels ELISA gemessen.
Ergebnisse: Die CD4+CD25+ T-Zellen stellten einen mittleren Anteil von 4,6% der CBMC dar (Range 1,7-7,7).Sie zeigten nur eine geringe Proliferationsantwort auf Stimulation mit IL2 (Median SI 1,8) im Vergleich zu den CBMC (SI 5,4, p=0,005, Wilcoxon’s 2 sample test). Im Verlgeich zu den CBMC-Kulturen zeigten Kokulturen mit CD4+CD25+-Zellen eine erniedrigte IL10- (Median: CBMC: 174,6; CBMC / CD4+CD25+: 2,6 pg/ml; p=0,04) und IFN-g-Ausschüttung (223; 11,5 pg/ml; p=0,01) nach Stimulation mit PHA. Im Gegensatz dazu waren die Ausschüttungen von TGF-ß (103,7; 114,1 pg/ml, p=0,2) und IL13 (701,6; 351,5 pg/ml; p=0,3) nahezu identisch in beiden Zellpopulationen.
Zusammenfassung: wir konnten CD4+CD25+ T-Zellen aus dem Nabelschnurblut isolieren. Diese zeigten nur eine geringe Proliferationsantwort auf IL2. Ebenfalls ist die IL10 und IFN-g Konzentration, aber nicht die TGF-ß und IL13 Konzentration, in Kokulturen von CBMC und CD4+CD25+ Zellen nach PHA-Stimulation erniedrigt. Die genaue Rolle der CD4+CD25+ Zellen in der Entwicklung eines TH2-Pänotyps in Neonaten bleibt noch zu ermitteln.","Background: To identify risk factors for the development of allergic sensitisation in early life a more detailed understanding of T-cell function in neonates is needed.
Objective: To isolate CD4+CD25+ T-cells from neonates and to study proliferative response and cytokine release of cord blood mononuclear cells (CBMC) and CD4+/CD25+ T cells.
Methods: Cord blood samples from term neonates (n= 42) were collected and CBMC were isolated by density gradient centrifugation. CD4+/CD25+ T cell isolation was performed using magnetic beads. CD4+CD25+ were cultured in triplicates either in medium alone or after stimulation with IL-2. After 7 days [3H]-Thymidin (0.4 µCi/Well) was added and the incorporated radioactivity was measured by scintillation counting after 16 hours. Proliferation was expressed as stimulation index (SI= ratio between the mean counts per minute of stimulated and unstimulated cells). For cytokine analysis, CBMC alone or CBMC cocultured with CD4+/CD25+ T cells were stimulated in the medium alone or with PHA (20 μg/ml; Sigma) and incubated in concentrations of 100,000 cells/well. Supernatants were obtained after 24 hours and cytokine levels were analysed using ELISA technique.
Results: We observed a population of CD4+CD25+ T-cells that represent on average 4,6% of total CBMC (Flow cytometrie, range 1.7-7.0%). This CD4+/CD25+ T-cells showed only a poor proliferative response after stimulation with IL-2 (Median SI: 1.8) compared to the proliferative response of CBMC (SI: 5.4, p= 0.005, Wilcoxon´s 2 sample test). Compared to CBMC alone, CBMC cocultured with CD4+/CD25+ T-cells (1:1) showed an alleviated release of IL-10 (Median: CBMC: 174.6; CBMC + CD4+/CD25+: 2.6 pg/ml; p= 0.04) and IFN-g; (223.8; 11.5 pg/ml; p= 0.01) in response to PHA, respectively. Contrariwise the TGF-ß (103.7; 114.1 pg/ml, p= 0.2) and IL-13 (701.6; 351.5 pg/ml; p= 0.3) release was similar in CBMC alone and CBMC cocultured with CD4+/CD25+ T-cells .
Conclusion: We were able to isolate CD4+/CD25+ T-cells from cord blood, which showed a poor proliferative capacity in response to IL-2. Moreover, the concentration of IL-10 and IFN-γ, but not TGF-ß and IL-13, is substantially downtrodden in supernatants of CBMC cocultured with CD4+/CD25+ T-cells. The functional role of CD4+/CD25+ T cells and its consequences for the persistance or development of a TH2 phenotype in neonates remains to be elaborated."]},{"key":"dc:format.medium","label":"Dc Format Medium","values":["application/pdf"]},{"key":"dc:title","label":"Title","values":["Phänotypische und funktionelle Charakterisierung von CD4+CD25+ \"regulatorischen\" T-Zellen aus dem Nabelschnurblut","Phenotypical and functional characteristics of CD4+CD25+ \"regulatory\" T-cells in human cord blood"]}]}],"canonical_facts":{"dc:contributor":["Kopp, Matthias"],"dc:creator":["Ngoumou, Gonza Balbina"],"dc:description.abstract":["Hintergrund: Um Risikofaktoren für die Entwicklung einer Allergischen Sensibilisierung zu identifizieren, ist es von nutzen die T-Zell-Funktion bei Neugeborenen zu untersuchen.
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Methoden: Von 42 gesunden Neugeborenen wurde Nabelschnurblut entnommen. CBMC wurden mittels Dichtezentrifugation isoliert. Anschließend wurden die CD4+CD25+-Zellen mit unterschiedlichen Methoden isoliert. Die isolierten CD4+CD25+-Zellen und CBMC wurden jeweils mit IL2 (und Medium alleine als negativ Kontrolle) in Kultur gesetzt. Nach 7 Tagen wurde die Proliferation der Zellen mittels 3H-Thymidin/Szintillation gemesssen. Für die Zytokin-Analyse wurden CBMC oder CBMC/CD4+CD25+-Kokulturen mit Medium alleine oder PHA stimuliert. Die Überstände wurden nach 24h abgezogen und die Zytokine IFN-g, TGF-ß, IL10 und IL13 mittels ELISA gemessen.
Ergebnisse: Die CD4+CD25+ T-Zellen stellten einen mittleren Anteil von 4,6% der CBMC dar (Range 1,7-7,7).Sie zeigten nur eine geringe Proliferationsantwort auf Stimulation mit IL2 (Median SI 1,8) im Vergleich zu den CBMC (SI 5,4, p=0,005, Wilcoxon’s 2 sample test). Im Verlgeich zu den CBMC-Kulturen zeigten Kokulturen mit CD4+CD25+-Zellen eine erniedrigte IL10- (Median: CBMC: 174,6; CBMC / CD4+CD25+: 2,6 pg/ml; p=0,04) und IFN-g-Ausschüttung (223; 11,5 pg/ml; p=0,01) nach Stimulation mit PHA. Im Gegensatz dazu waren die Ausschüttungen von TGF-ß (103,7; 114,1 pg/ml, p=0,2) und IL13 (701,6; 351,5 pg/ml; p=0,3) nahezu identisch in beiden Zellpopulationen.
Zusammenfassung: wir konnten CD4+CD25+ T-Zellen aus dem Nabelschnurblut isolieren. Diese zeigten nur eine geringe Proliferationsantwort auf IL2. Ebenfalls ist die IL10 und IFN-g Konzentration, aber nicht die TGF-ß und IL13 Konzentration, in Kokulturen von CBMC und CD4+CD25+ Zellen nach PHA-Stimulation erniedrigt. Die genaue Rolle der CD4+CD25+ Zellen in der Entwicklung eines TH2-Pänotyps in Neonaten bleibt noch zu ermitteln.","Background: To identify risk factors for the development of allergic sensitisation in early life a more detailed understanding of T-cell function in neonates is needed.
Objective: To isolate CD4+CD25+ T-cells from neonates and to study proliferative response and cytokine release of cord blood mononuclear cells (CBMC) and CD4+/CD25+ T cells.
Methods: Cord blood samples from term neonates (n= 42) were collected and CBMC were isolated by density gradient centrifugation. CD4+/CD25+ T cell isolation was performed using magnetic beads. CD4+CD25+ were cultured in triplicates either in medium alone or after stimulation with IL-2. After 7 days [3H]-Thymidin (0.4 µCi/Well) was added and the incorporated radioactivity was measured by scintillation counting after 16 hours. Proliferation was expressed as stimulation index (SI= ratio between the mean counts per minute of stimulated and unstimulated cells). For cytokine analysis, CBMC alone or CBMC cocultured with CD4+/CD25+ T cells were stimulated in the medium alone or with PHA (20 μg/ml; Sigma) and incubated in concentrations of 100,000 cells/well. Supernatants were obtained after 24 hours and cytokine levels were analysed using ELISA technique.
Results: We observed a population of CD4+CD25+ T-cells that represent on average 4,6% of total CBMC (Flow cytometrie, range 1.7-7.0%). This CD4+/CD25+ T-cells showed only a poor proliferative response after stimulation with IL-2 (Median SI: 1.8) compared to the proliferative response of CBMC (SI: 5.4, p= 0.005, Wilcoxon´s 2 sample test). Compared to CBMC alone, CBMC cocultured with CD4+/CD25+ T-cells (1:1) showed an alleviated release of IL-10 (Median: CBMC: 174.6; CBMC + CD4+/CD25+: 2.6 pg/ml; p= 0.04) and IFN-g; (223.8; 11.5 pg/ml; p= 0.01) in response to PHA, respectively. Contrariwise the TGF-ß (103.7; 114.1 pg/ml, p= 0.2) and IL-13 (701.6; 351.5 pg/ml; p= 0.3) release was similar in CBMC alone and CBMC cocultured with CD4+/CD25+ T-cells .
Conclusion: We were able to isolate CD4+/CD25+ T-cells from cord blood, which showed a poor proliferative capacity in response to IL-2. Moreover, the concentration of IL-10 and IFN-γ, but not TGF-ß and IL-13, is substantially downtrodden in supernatants of CBMC cocultured with CD4+/CD25+ T-cells. The functional role of CD4+/CD25+ T cells and its consequences for the persistance or development of a TH2 phenotype in neonates remains to be elaborated."],"dc:format.medium":["application/pdf"],"dc:subject":["CD4+CD25+","T-Zellen","Zytokin","Allergie","Regulatorische T-Zellen","T-cells","Cytokine","Allergy","Regulatory T-cells"],"dc:title":["Phänotypische und funktionelle Charakterisierung von CD4+CD25+ \"regulatorischen\" T-Zellen aus dem Nabelschnurblut","Phenotypical and functional characteristics of CD4+CD25+ \"regulatory\" T-cells in human cord blood"],"dc:type":["DoctoralThesis"]},"updated_at":"2026-07-24T02:22:40Z"}