Klonierung und Charakterisierung des Zytokins Interleukin-18 sowie der Zelloberflächenproteine CD3 epsilon, CD4, CD8 alpha und MHCII beta der Ente : Generierung von Werkzeugen für immunologische Studien im Enten-Hepatitits-B-Virus-Modell

Die Ente mit ihrem Enten-Hepatitis-B-Virus ist ein wichtiges Tiermodell für die Untersuchung der hepadnaviralen Infektion des Menschen. Bisher wurde die Nutzung dieses Modells durch das Fehlen von charakterisierten Komponenten des Entenimmunsystems, wie Zytokinen und Zelloberflächenmarkern, behindert. <br>Das Zytokin IL-18 kann je nach der An- oder Abwesenheit anderer Zytokine eine Immunreaktion des Typs Th1- aber auch des Typs Th2 hervorrufen. Im HBV-transgenen Mausmodell inhibiert IL-18 die hepadnavirale Replikation in der Leber. <br>Daher sollte das IL-18 der Ente (DuIL-18) charakterisiert werden. Die DuIL-18 cDNA wurde mittels RT-PCR kloniert, die abgeleitete Peptidsequenz des reifen Proteins weist über 85% Identität zu IL-18 des Huhns und über 20% zu den IL 18 Homologen der Säuger auf. DuIL-18 wurde rekombinant in E. coli exprimiert und ist biologisch aktiv, es induziert sowohl die Freisetzung von IFN-g aus Hühner-B-Zellen, als auch die Proliferation von Lymphozyten. Das rekombinant exprimierte Protein diente zur Herstellung eines Kaninchen¬antiserums gegen DuIL 18, welches in der Lage ist, die biologische Aktivität von DuIL-18 zu neutralisieren. Die Expression von DuIL-18 Vorläuferprotein in einer Hühner-Hepatomzelllinie führte zur Freisetzung von bioaktivem reifem DuIL-18 aus diesen Zellen, in welchen es möglicherweise durch eine endogene Caspase prozessiert wurde. Bisher wurde in Säugerzellen rekombinant exprimiertes IL-18 nur durch Koexpression von rekombinanter reifer Caspase-1 oder in vitro-Prozessierung in die aktive Form überführt. <br>Wie in Säugetieren wird DuIL-18-mRNA in lymphatischen Organen der Ente exprimiert, und die Menge der Transkripte kann durch Aktivierung von Toll like-Rezeptoren oder durch IFN-g gesteigert werden. Mit Hilfe des Kaninchen¬antiserums kann DuIL-18-Vorläuferprotein in der Leber von Enten nachgewiesen werden. <br>Ein möglicher Einfluss von DuIL-18 auf den Verlauf der hepadnaviralen Infektion kann nun mit Hilfe des zur Verfügung stehenden rekombinant exprimierten DuIL-18 sowie des neutralisierenden Antiserums in vitro und in vivo untersucht werden. <br>Als zweites Projekt wurden die T-Zell-Oberflächenmarker CD3e, CD4 und CD8a sowie die MHCIIb-Kette der Peking- und der Warzenente kloniert. Gegen DuCD4 und DuCD8a wurden sowohl polyklonale Kaninchenseren als auch monoklonale Mausantikörper erzeugt. Mit Hilfe der monoklonalen Mausantikörper und eines monoklonalen Rattenantikörpers, der gegen ein konserviertes zytoplasmatisches Epitop gerichtet ist, konnten T-Zell-Populationen der Pekingente charakterisiert werden. T-Zellen der Warzenente konnten mit den monoklonalen a-DuCD4 und a-DuCD8a-Antikörpern nicht angefärbt werden, obwohl hohe Sequenzähnlichkeit besteht. Erstaunlicher¬weise exprimieren Lymphozyten aus der Bursa fabricii der Pekingente CD8a, jedoch weder CD4 noch CD3. Welche Funktion das CD8-Molekülauf B-Zellen ausübt, wird Gegenstand weiterer Untersuchung sein. Die erzeugten Antikörper können zur Identifikation und Isolation von Immunzellpopulationen der Pekingente genutzt werden, was die Möglichkeiten zur Untersuchung immunologischer Vorgänge in diesem Tiermodell, auch im Hinblick auf die hepadnavirale Infektion, wesentlich erweitert.

Author dc:creator

• Mannes, Nina Katrin

Contributors dc:contributor

• Sippel, Albrecht E.

• Enten-Hepatitis-B-Virus
• DHBV
• duck-hepatitis-B-virus, DHBV

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https://freidok.uni-freiburg.de/data/1989

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