Methoden zur Charakterisierung von großtechnisch hergestellten Lipoplexen zum Gentransfer
type: CreativeWork
description: Die Instabilität von lipidbasierten Gentransfersystemen und die damit verbundene Schwierigkeit der großtechnischen Herstellung und Lagerung ist ein schwerwiegendes Problem für die Entwicklung und Anwendung gentherapeutischer Arzneimittel. Im Rahmen dieser Arbeit wird eine eingehende Charakterisierung von Lipoplexen, durchgeführt, die durch ein kontinuierliches Verfahren mit anschließender Lyophilisation in großem Maßstab hergestellt wurden. Hierzu wurden Methoden für die Analytik der biologischen Aktivität und physikochemischen Stabilität entwickelt. Die Stabilität der Lipoplexe wurde über einen Zeitraum von 11 Monaten verfolgt und es wurde die Reproduzierbarkeit des Herstellverfahrens und der Methoden zur Quantifizierung der Ausgangssubstanzen untersucht. Um strukturelle Einflüsse des Transfektionsreagenzes zu untersuchen wurden Lipoplexe aus DNA und den liposomalen Transfektionsreagenzien DAC-30 und DC-30, welche beide aus dem neutralen Lipid Dioleoylphosphatidylethanolamin (DOPE) und den kationischen Cholesterolderivaten DAC-Cholesterol (3ß-[N-(N,N´-dimethylaminoethan)-carbamoyl]-cholesterol) bzw. DC-Cholesterol (3ß-[N-(N´,N´-Dimethylaminoethan)-carbamoyl]-cholesterol) im Verhältnis 7:3 (w/w) bestehen, analysiert. Um die Besonderheiten der großtechnischen Herstellung zu erfassen, wurden zur Entwicklung der Methoden Lipoplexe eingesetzt, die in kleinem Maßstab durch Pipettieren hergestellt wurden und mit den im großen Maßstab hergestellten lyophilisierten und redispergierten Lipoplexen verglichen. Die biologische Aktivität wurde durch die Bestimmung der Transfektionseffizienz mittels Durchflusszytometrie ermittelt. Zur Untersuchung der Auswirkung auf die Zellviabilität erwies sich ebenfalls die durchflusszytometrische Analyse als geeignet. Die physikochemische Stabilität der Lipoplexe wurde auf verschiedene Arten untersucht. Die Partikelgröße und Struktur wurden durch Photonenkorrelationsspektroskopie (PCS) und Cryotransmissions-Elektronenmikroskopie (Cryo-TEM) be…
abstract: Die Instabilität von lipidbasierten Gentransfersystemen und die damit verbundene Schwierigkeit der großtechnischen Herstellung und Lagerung ist ein schwerwiegendes Problem für die Entwicklung und Anwendung gentherapeutischer Arzneimittel. Im Rahmen dieser Arbeit wird eine eingehende Charakterisierung von Lipoplexen, durchgeführt, die durch ein kontinuierliches Verfahren mit anschließender Lyophilisation in großem Maßstab hergestellt wurden. Hierzu wurden Methoden für die Analytik der biologischen Aktivität und physikochemischen Stabilität entwickelt. Die Stabilität der Lipoplexe wurde über einen Zeitraum von 11 Monaten verfolgt und es wurde die Reproduzierbarkeit des Herstellverfahrens und der Methoden zur Quantifizierung der Ausgangssubstanzen untersucht. Um strukturelle Einflüsse des Transfektionsreagenzes zu untersuchen wurden Lipoplexe aus DNA und den liposomalen Transfektionsreagenzien DAC-30 und DC-30, welche beide aus dem neutralen Lipid Dioleoylphosphatidylethanolamin (DOPE) und den kationischen Cholesterolderivaten DAC-Cholesterol (3ß-[N-(N,N´-dimethylaminoethan)-carbamoyl]-cholesterol) bzw. DC-Cholesterol (3ß-[N-(N´,N´-Dimethylaminoethan)-carbamoyl]-cholesterol) im Verhältnis 7:3 (w/w) bestehen, analysiert. Um die Besonderheiten der großtechnischen Herstellung zu erfassen, wurden zur Entwicklung der Methoden Lipoplexe eingesetzt, die in kleinem Maßstab durch Pipettieren hergestellt wurden und mit den im großen Maßstab hergestellten lyophilisierten und redispergierten Lipoplexen verglichen. Die biologische Aktivität wurde durch die Bestimmung der Transfektionseffizienz mittels Durchflusszytometrie ermittelt. Zur Untersuchung der Auswirkung auf die Zellviabilität erwies sich ebenfalls die durchflusszytometrische Analyse als geeignet. Die physikochemische Stabilität der Lipoplexe wurde auf verschiedene Arten untersucht. Die Partikelgröße und Struktur wurden durch Photonenkorrelationsspektroskopie (PCS) und Cryotransmissions-Elektronenmikroskopie (Cryo-TEM) be…
author: Clement, Jule
keywords: nicht-viraler Gentransfer, kationisches Lipid, großtechnische Herstellung, Charakterisierungsmethoden, non-viral gene transfer, analytical methods, cationic lipid, DNA, large-scale production
date modified: 2026-07-24T02:22:33Z
provider: University of Freiburg
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: University of Freiburg