{"id":{"repo_id":"freiburg-diss","oai_identifier":"oai:freidok.uni-freiburg.de:1794"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/freiburg-diss/oai:freidok.uni-freiburg.de:1794","repository":{"repo_id":"freiburg-diss","name":"University of Freiburg","base_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/oai/oai2.php"},"display":{"title":"Induktion Borna Disease Virus-spezifischer Immunität durch Vakzinierung mit dendritischen Zellen","abstract":"Das Borna Disease Virus (BDV) ist ein stark neurotropes, nicht-zytolytisches Virus, das bei vielen Warmblütern tödlich verlaufende Meningoenzephalitiden verursachen kann. Dabei spielen immunpathologische Prozesse, die wesentlich durch CD8+ T-Lymphozyten vermittelt werden, eine zentrale Rolle. Die Suszeptibilität von Mäusen gegenüber der BDV-induzierten Erkrankung ist sehr unterschiedlich: Mäuse vom Stamm MRL erkranken spontan, während Mäuse vom Stamm B10.BR aufgrund einer immunologischen Ignoranz trotz hoher zerebraler Viruslast krankheitsresistent sind. Die Hypersensitivität der MRL-Tiere könnte auf einer erniedrigten Aktivierungsschwelle der CD8+ T-Zellen beruhen. Falls diese Hypothese zutrifft, sollte man MRL-Mäuse leichter mit peptidbeladenen dendritischen Zellen (DCs) immunisieren können als B10.BR-Mäuse.
Das Ziel dieser Arbeit war die Etablierung eines DC-Immunisierungsprotokolls und die Evaluierung verschiedener experimenteller Ansätze zur Quantifizierung der induzierten Immunantwort. Zunächst wurde ein Protokoll zur effizienten in vitro-Generierung syngener DCs aus Knochenmark erarbeitet. Diese Zellen wurden anschließend durchflusszytometrisch charakterisiert. Für die Immunisierung von Mäusen wurden DCs entweder mit dem immun-dominanten zytotoxischen T-Zell (CTL)-Epitop aus dem BDV-Nukleoprotein (TELEISSI) oder mit einem Kontrollpeptid beladen. Die erfolgreiche Induktion BDV-spezifischer CTLs wurde mit unabhängigen Testverfahren nachgewiesen. Milzlymphozyten aus Mäusen, die mit TELEISSI-beladenen DCs immunisiert worden waren, zeigten im 51Chromfreisetzungstest eine spezifische Lyse peptidmarkierter Zielzellen. Nach Immunisierung von Mäusen mit TELEISSI-beladenen DCs trat eine spezifische protektive Immunität gegen ein rekombinan-tes Vacciniavirus auf, welches das BDV-Nukleoprotein exprimiert. Durch Immunisierung mit TELEISSI-beladenen DCs konnte zudem die immunologische Ignoranz persistent BDV-infizierter Mäuse gebrochen werden, die Tiere entwickelten daraufhin BDV-typische neurologische Symptome. Weiter resultierte die Vakzinierung von Mäusen mit TELEISSI-beladenen DCs in einem moderaten Impfschutz gegen nachfolgende Infektion mit BDV. Insgesamt konnte mit dieser Arbeit somit die methodische Basis zur Aufklärung der immuno-logischen Unterschiede zwischen MRL- und B10.BR-Mäusen gelegt werden. Für verglei-chende Untersuchungen der T-Zell-Aktivierungsschwellen der beiden Mausstämme erwies sich der Vacciniavirus-Test als ungeeignet, da sich herausstellte, dass MRL-Mäuse eine stark verminderte Vacciniavirus-Resistenz aufweisen. Von den untersuchten Verfahren scheint der 51Chromfreisetzungstest am besten geeignet zu sein, mögliche Unterschiede aufzudecken.","abstract_html":"Das Borna Disease Virus (BDV) ist ein stark neurotropes, nicht-zytolytisches Virus, das bei vielen Warmblütern tödlich verlaufende Meningoenzephalitiden verursachen kann. Dabei spielen immunpathologische Prozesse, die wesentlich durch CD8+ T-Lymphozyten vermittelt werden, eine zentrale Rolle. Die Suszeptibilität von Mäusen gegenüber der BDV-induzierten Erkrankung ist sehr unterschiedlich: Mäuse vom Stamm MRL erkranken spontan, während Mäuse vom Stamm B10.BR aufgrund einer immunologischen Ignoranz trotz hoher zerebraler Viruslast krankheitsresistent sind. Die Hypersensitivität der MRL-Tiere könnte auf einer erniedrigten Aktivierungsschwelle der CD8+ T-Zellen beruhen. Falls diese Hypothese zutrifft, sollte man MRL-Mäuse leichter mit peptidbeladenen dendritischen Zellen (DCs) immunisieren können als B10.BR-Mäuse. <br>Das Ziel dieser Arbeit war die Etablierung eines DC-Immunisierungsprotokolls und die Evaluierung verschiedener experimenteller Ansätze zur Quantifizierung der induzierten Immunantwort. Zunächst wurde ein Protokoll zur effizienten in vitro-Generierung syngener DCs aus Knochenmark erarbeitet. Diese Zellen wurden anschließend durchflusszytometrisch charakterisiert. Für die Immunisierung von Mäusen wurden DCs entweder mit dem immun-dominanten zytotoxischen T-Zell (CTL)-Epitop aus dem BDV-Nukleoprotein (TELEISSI) oder mit einem Kontrollpeptid beladen. Die erfolgreiche Induktion BDV-spezifischer CTLs wurde mit unabhängigen Testverfahren nachgewiesen. Milzlymphozyten aus Mäusen, die mit TELEISSI-beladenen DCs immunisiert worden waren, zeigten im 51Chromfreisetzungstest eine spezifische Lyse peptidmarkierter Zielzellen. 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Das Ziel dieser Arbeit war die Etablierung eines DC-Immunisierungsprotokolls und die Evaluierung verschiedener experimenteller Ansätze zur Quantifizierung der induzierten Immunantwort. Zunächst wurde ein Protokoll zur effizienten in vitro-Generierung syngener DCs aus Knochenmark erarbeitet. Diese Zellen wurden anschließend durchflusszytometrisch charakterisiert. Für die Immunisierung von Mäusen wurden DCs entweder mit dem immun-dominanten zytotoxischen T-Zell (CTL)-Epitop aus dem BDV-Nukleoprotein (TELEISSI) oder mit einem Kontrollpeptid beladen. Die erfolgreiche Induktion BDV-spezifischer CTLs wurde mit unabhängigen Testverfahren nachgewiesen. Milzlymphozyten aus Mäusen, die mit TELEISSI-beladenen DCs immunisiert worden waren, zeigten im 51Chromfreisetzungstest eine spezifische Lyse peptidmarkierter Zielzellen. Nach Immunisierung von Mäusen mit TELEISSI-beladenen DCs trat eine spezifische protektive Immunität gegen ein rekombinan-tes Vacciniavirus auf, welches das BDV-Nukleoprotein exprimiert. Durch Immunisierung mit TELEISSI-beladenen DCs konnte zudem die immunologische Ignoranz persistent BDV-infizierter Mäuse gebrochen werden, die Tiere entwickelten daraufhin BDV-typische neurologische Symptome. Weiter resultierte die Vakzinierung von Mäusen mit TELEISSI-beladenen DCs in einem moderaten Impfschutz gegen nachfolgende Infektion mit BDV. Insgesamt konnte mit dieser Arbeit somit die methodische Basis zur Aufklärung der immuno-logischen Unterschiede zwischen MRL- und B10.BR-Mäusen gelegt werden. Für verglei-chende Untersuchungen der T-Zell-Aktivierungsschwellen der beiden Mausstämme erwies sich der Vacciniavirus-Test als ungeeignet, da sich herausstellte, dass MRL-Mäuse eine stark verminderte Vacciniavirus-Resistenz aufweisen. Von den untersuchten Verfahren scheint der 51Chromfreisetzungstest am besten geeignet zu sein, mögliche Unterschiede aufzudecken.","Borna Disease Virus (BDV) is a neurotropic, non-cytolytic virus that can cause fatal meningoencephalitis in warm-blooded animals. Immunopathological mechanisms, mediated mainly by CD8+ T-lymphocytes, play a central role in these processes. Mice of different strains show fundamental differences in the susceptibility to BDV-induced disease: MRL-mice develop spontaneous neurological disorder, whereas B10.BR-mice are resistant to the disease due to immunological ignorance despite massive viral replication in the brain. One explanation for the hypersensitivity of MRL-mice could be a lower activation threshold for CD8+ T-cells. In this case, MRL-mice should be vaccinated with peptide-loaded dendritic cells (DCs) more easily than B10.BR-mice.
The aim of the thesis was to establish a protocol for DC-immunizations and to evaluate various assays for the quantification of DC-induced immunological responses after transfer of peptide-loaded DCs in mice. First, a protocol for the efficient in vitro generation of DCs from bone marrow was developed and expression patterns of dendritic cell markers were analyzed in flow-cytometry. DCs were loaded either with the immunodominant cytotoxic T-cell (CTL) epitope of the BDV-nucleoprotein (TELEISSI), or with a control-peptide, before being transferred subcutaneously. Successful induction of BDV-specific CTLs was proven with several immunological assays: Splenic lymphocytes from DC-immunized mice showed specific lysis of peptide-marked target cells in a standard in vitro cytotoxicity assay. After immunization of mice with TELEISSI-loaded DCs, specific protective immunity occurred against a recombinant vaccinia virus, expressing the BDV-nucleoprotein. Furthermore, the immunological ignorance of mice persistently infected with BDV could be overcome by immunization with TELEISSI-loaded DCs, resulting in the animals developing BDV-typical neurological symptoms. Vaccination also induced partial protection against intracerebral challenge with BDV. In summary, a methodological basis for future studies of immunological differences between MRL- and B10.BR-mice could be established. Out of the investigated assays, the in vitro cytotoxicity assay seems to be the most suitable method to reveal possible differences between the two strains. Furthermore, it could be demonstrated that the standard vaccinia virus assay is insufficient for the comparison of T-cell activation thresholds between MRL- and B10.BR-mice, because MRL-mice turned out to have a significantly lower natural resistance towards vaccinia viruses."]},{"key":"dc:format.medium","label":"Dc Format Medium","values":["application/pdf"]},{"key":"dc:title","label":"Title","values":["Induktion Borna Disease Virus-spezifischer Immunität durch Vakzinierung mit dendritischen Zellen","Induction of borna disease virus specific immunity by vaccination with dendritic cells"]}]}],"canonical_facts":{"dc:contributor":["Stäheli, Peter"],"dc:creator":["Fassnacht, Ulrike"],"dc:description.abstract":["Das Borna Disease Virus (BDV) ist ein stark neurotropes, nicht-zytolytisches Virus, das bei vielen Warmblütern tödlich verlaufende Meningoenzephalitiden verursachen kann. Dabei spielen immunpathologische Prozesse, die wesentlich durch CD8+ T-Lymphozyten vermittelt werden, eine zentrale Rolle. Die Suszeptibilität von Mäusen gegenüber der BDV-induzierten Erkrankung ist sehr unterschiedlich: Mäuse vom Stamm MRL erkranken spontan, während Mäuse vom Stamm B10.BR aufgrund einer immunologischen Ignoranz trotz hoher zerebraler Viruslast krankheitsresistent sind. Die Hypersensitivität der MRL-Tiere könnte auf einer erniedrigten Aktivierungsschwelle der CD8+ T-Zellen beruhen. Falls diese Hypothese zutrifft, sollte man MRL-Mäuse leichter mit peptidbeladenen dendritischen Zellen (DCs) immunisieren können als B10.BR-Mäuse.
Das Ziel dieser Arbeit war die Etablierung eines DC-Immunisierungsprotokolls und die Evaluierung verschiedener experimenteller Ansätze zur Quantifizierung der induzierten Immunantwort. Zunächst wurde ein Protokoll zur effizienten in vitro-Generierung syngener DCs aus Knochenmark erarbeitet. Diese Zellen wurden anschließend durchflusszytometrisch charakterisiert. Für die Immunisierung von Mäusen wurden DCs entweder mit dem immun-dominanten zytotoxischen T-Zell (CTL)-Epitop aus dem BDV-Nukleoprotein (TELEISSI) oder mit einem Kontrollpeptid beladen. Die erfolgreiche Induktion BDV-spezifischer CTLs wurde mit unabhängigen Testverfahren nachgewiesen. Milzlymphozyten aus Mäusen, die mit TELEISSI-beladenen DCs immunisiert worden waren, zeigten im 51Chromfreisetzungstest eine spezifische Lyse peptidmarkierter Zielzellen. Nach Immunisierung von Mäusen mit TELEISSI-beladenen DCs trat eine spezifische protektive Immunität gegen ein rekombinan-tes Vacciniavirus auf, welches das BDV-Nukleoprotein exprimiert. Durch Immunisierung mit TELEISSI-beladenen DCs konnte zudem die immunologische Ignoranz persistent BDV-infizierter Mäuse gebrochen werden, die Tiere entwickelten daraufhin BDV-typische neurologische Symptome. Weiter resultierte die Vakzinierung von Mäusen mit TELEISSI-beladenen DCs in einem moderaten Impfschutz gegen nachfolgende Infektion mit BDV. Insgesamt konnte mit dieser Arbeit somit die methodische Basis zur Aufklärung der immuno-logischen Unterschiede zwischen MRL- und B10.BR-Mäusen gelegt werden. Für verglei-chende Untersuchungen der T-Zell-Aktivierungsschwellen der beiden Mausstämme erwies sich der Vacciniavirus-Test als ungeeignet, da sich herausstellte, dass MRL-Mäuse eine stark verminderte Vacciniavirus-Resistenz aufweisen. Von den untersuchten Verfahren scheint der 51Chromfreisetzungstest am besten geeignet zu sein, mögliche Unterschiede aufzudecken.","Borna Disease Virus (BDV) is a neurotropic, non-cytolytic virus that can cause fatal meningoencephalitis in warm-blooded animals. Immunopathological mechanisms, mediated mainly by CD8+ T-lymphocytes, play a central role in these processes. Mice of different strains show fundamental differences in the susceptibility to BDV-induced disease: MRL-mice develop spontaneous neurological disorder, whereas B10.BR-mice are resistant to the disease due to immunological ignorance despite massive viral replication in the brain. One explanation for the hypersensitivity of MRL-mice could be a lower activation threshold for CD8+ T-cells. In this case, MRL-mice should be vaccinated with peptide-loaded dendritic cells (DCs) more easily than B10.BR-mice.
The aim of the thesis was to establish a protocol for DC-immunizations and to evaluate various assays for the quantification of DC-induced immunological responses after transfer of peptide-loaded DCs in mice. First, a protocol for the efficient in vitro generation of DCs from bone marrow was developed and expression patterns of dendritic cell markers were analyzed in flow-cytometry. DCs were loaded either with the immunodominant cytotoxic T-cell (CTL) epitope of the BDV-nucleoprotein (TELEISSI), or with a control-peptide, before being transferred subcutaneously. Successful induction of BDV-specific CTLs was proven with several immunological assays: Splenic lymphocytes from DC-immunized mice showed specific lysis of peptide-marked target cells in a standard in vitro cytotoxicity assay. After immunization of mice with TELEISSI-loaded DCs, specific protective immunity occurred against a recombinant vaccinia virus, expressing the BDV-nucleoprotein. Furthermore, the immunological ignorance of mice persistently infected with BDV could be overcome by immunization with TELEISSI-loaded DCs, resulting in the animals developing BDV-typical neurological symptoms. Vaccination also induced partial protection against intracerebral challenge with BDV. In summary, a methodological basis for future studies of immunological differences between MRL- and B10.BR-mice could be established. Out of the investigated assays, the in vitro cytotoxicity assay seems to be the most suitable method to reveal possible differences between the two strains. Furthermore, it could be demonstrated that the standard vaccinia virus assay is insufficient for the comparison of T-cell activation thresholds between MRL- and B10.BR-mice, because MRL-mice turned out to have a significantly lower natural resistance towards vaccinia viruses."],"dc:format.medium":["application/pdf"],"dc:subject":["Vakzinierung","vaccination","dendritic cell","Borna Disease","immunity","T-cell"],"dc:title":["Induktion Borna Disease Virus-spezifischer Immunität durch Vakzinierung mit dendritischen Zellen","Induction of borna disease virus specific immunity by vaccination with dendritic cells"],"dc:type":["DoctoralThesis"]},"updated_at":"2026-07-24T02:22:28Z"}