{"id":{"repo_id":"freiburg-diss","oai_identifier":"oai:freidok.uni-freiburg.de:1518"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/freiburg-diss/oai:freidok.uni-freiburg.de:1518","repository":{"repo_id":"freiburg-diss","name":"University of Freiburg","base_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/oai/oai2.php"},"display":{"title":"Cre-lox-basierte Inaktivierung des Pbx3-Gens","abstract":"Pbx3 ist ein Homöodomän-Transkriptionsfaktor, der 1991 erstmals aufgrund seiner ausgeprägten Homologie zum Proto-Onkogen Pbx1 isoliert wurde. Zusammen mit einer Untergruppe von Homöodomän-Proteinen bindet es mit für die Entwicklung der Säugetiere unbekannten Konsequenzen in hochmolekularen Komplexen an die DNA. Die Beteiligung des Pbx3-Proteins an der Regulation der embryonalen Entwicklung wurde durch die Generierung von Pbx3-defizienten Mäusen untersucht. <br>Zur Herstellung eines Cre-lox-basierten „Targeting“-Vektors wurde ein Teil der Genregion des Pbx3-Genes subkloniert und das Exon 3 als Zielsequenz sowie syngene DNA zur homologen Rekombination in den pFlox-Vektor eingefügt. Das linearisierte Rekombinationskonstrukt GB24new wurde durch Elektroporation in embryonale Stammzellen eingebracht und 2 Klone mit homologem Rekombinationsereignis am Pbx3-Lokus durch Southern-Blot- und PCR-Analysen identifiziert. Anschließend wurden diese 2 Klone mit dem CMV-Cre-Plasmid durch Elektroporation transfiziert und mittels Southern- und PCR-Analysen 3 Klone isoliert, die keine Selektions- und keine Zielsequenz mehr besaßen. Durch Mikroinjektion der Klone in Blastozysten wurden 5 chimäre Männchen gewonnen. Durch zwei hochchimäre Männchen konnte eine Keimbahntransmission und durch Heterozygotenverpaarungen Pbx-3-defiziente Tiere erhalten werden. <br>Die Pbx3-defizienten Mäuse starben einige Stunden nach Geburt und wiesen keinen milchgefüllten Magen auf. Röntgenuntersuchungen neugeborener Pbx3-/-Mäuse demonstrierten einen luftgefüllten Intestinaltrakt, Blutuntersuchung wiesen erniedrigte Glukose und erhöhtes Tryptophan nach. Histologisch wiesen die inneren Organe keine Besonderheiten auf, in Skelettfärbungen konnten keinerlei Malformationen festgestellt werden. In-situ- und „Whole-mount“-in-situ-Hybridisierungen von Wildtyp-Mäusen E 9.5-13.5 zeigten eine besonders starke Expression des Pbx3-Proteins in der Medulla oblongata, dem Hirnstamm und kaudalen Teil des Mittelhirns. Immunhistochemisch waren jedoch keine neuronalen Veränderungen zu erkennen.","abstract_html":"Pbx3 ist ein Homöodomän-Transkriptionsfaktor, der 1991 erstmals aufgrund seiner ausgeprägten Homologie zum Proto-Onkogen Pbx1 isoliert wurde. Zusammen mit einer Untergruppe von Homöodomän-Proteinen bindet es mit für die Entwicklung der Säugetiere unbekannten Konsequenzen in hochmolekularen Komplexen an die DNA. Die Beteiligung des Pbx3-Proteins an der Regulation der embryonalen Entwicklung wurde durch die Generierung von Pbx3-defizienten Mäusen untersucht. &lt;br&gt;Zur Herstellung eines Cre-lox-basierten „Targeting“-Vektors wurde ein Teil der Genregion des Pbx3-Genes subkloniert und das Exon 3 als Zielsequenz sowie syngene DNA zur homologen Rekombination in den pFlox-Vektor eingefügt. 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Here we present Pbx3-knock-out mice, generated with the Cre/lox-System, which die on day 1 post partum. The Pbx3 deficient pups display no milk in their stomachs indicating that they do not nurse. Instead we observe free air in the gastrointestinal tract and cyanosis shortly before they die. The exact cause of their sudden death is not yet clear, but our observations lead to hypothesis of respiratory failure due to impaired neural development."]},{"key":"dc:format.medium","label":"Dc Format Medium","values":["application/pdf"]},{"key":"dc:title","label":"Title","values":["Cre-lox-basierte Inaktivierung des Pbx3-Gens","Cre-lox based inactivation of the Pbx3 gene"]}]}],"canonical_facts":{"dc:contributor":["Otto, Florian"],"dc:creator":["Gantert, Melanie Pia"],"dc:description.abstract":["Pbx3 ist ein Homöodomän-Transkriptionsfaktor, der 1991 erstmals aufgrund seiner ausgeprägten Homologie zum Proto-Onkogen Pbx1 isoliert wurde. 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