{"id":{"repo_id":"freiburg-diss","oai_identifier":"oai:freidok.uni-freiburg.de:1338"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/freiburg-diss/oai:freidok.uni-freiburg.de:1338","repository":{"repo_id":"freiburg-diss","name":"University of Freiburg","base_url":"https://freidok.uni-freiburg.de/oai/oai2.php"},"display":{"title":"Die Rolle des Interferon-g bei der Hemmung der Replikation des Hepatitis-C-Virus","abstract":"Das Hepatitis-C-Virus ist weltweit die Hauptursache für chronische Hepatitiden, Leberzirrhosen und hepatozelluläre Karzinome. Die derzeitige Standardtherapie der Hepatitis-C besteht in einer Kombinationsbehandlung aus Peg-Interferon-a und Ribavirin. Allerdings kann mit diesen Medikamenten nur ein Teil der Patienten von der Erkrankung geheilt werden. Die Erforschung des HCV-Genoms, der viralen Replikation, sowie der Wirkmechanismen der eingesetzten Medikamente war lange Zeit durch das Fehlen eines geeigneten Tiermodells oder Zellkultursystems behindert. Im Jahr 1999 gelang es Lohmann et al. HCV-Replikons zu konstruieren, die in Zellkultur replizieren. Mit Hilfe dieser Replikons, die auch die Grundlage meiner Arbeit bildeten, konnte die HCV-Forschung auf Zellkulturebene rasch voran gebracht werden. <br>In vorangehenden Studien wurde nachgewiesen, daß IFN-g einen hemmenden Effekt auf die HCV-Replikation hat. Meine Experimente bestätigten die direkt antivirale Wirkung von IFN-g. <br>Mit Hilfe einer strangspezifischen Northernblotanalyse konnte gezeigt werden, daß der hemmende Einfluß des IFN-g, im Unterschied zu IFN-a, sich in gleichem Maße auf (+)- wie auf (-)-Strang-HCV-RNA auswirkte. <br>Die IFN-g-Titration in der Immunfluoreszenz, sowie die Northernblotanalyse zeigten eine dosisabhängige Inhibition der Protein- und RNA-Synthese durch dieses Zytokin. Neben IFN-g spielen auch andere Immunmodulatoren eine wichtige Rolle bei der antiviralen Abwehr. In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, daß TNF-a, welches im Mausmodell die Replikation des HBV inhibiert, die HCV-RNA-Syntheserate nicht meßbar veränderte. Auch die Interleukine-12 und -18 sowie Lipopolysaccharide nahmen keinen Einfluß auf die HCV-Proteinsynthese. <br>In weiteren Experimenten wurde die antivirale Wirkung einiger IFN-g induzierter Effektorproteine untersucht. Weder das Stickstoffmonoxid noch die Indolamin-2,3-dioxy-genase hemmten die Expression der HCV-Proteine im HCV-Replikonsystem. Auch die kleinen GTPasen zeigten nur einen geringen inhibierenden Effekt auf die HCV-Replikation. Dies läßt vermuten, daß andere durch IFN-g induzierte Genprodukte für den antiviralen Effekt des Zytokins verantwortlich sind.","abstract_html":"Das Hepatitis-C-Virus ist weltweit die Hauptursache für chronische Hepatitiden, Leberzirrhosen und hepatozelluläre Karzinome. Die derzeitige Standardtherapie der Hepatitis-C besteht in einer Kombinationsbehandlung aus Peg-Interferon-a und Ribavirin. Allerdings kann mit diesen Medikamenten nur ein Teil der Patienten von der Erkrankung geheilt werden. Die Erforschung des HCV-Genoms, der viralen Replikation, sowie der Wirkmechanismen der eingesetzten Medikamente war lange Zeit durch das Fehlen eines geeigneten Tiermodells oder Zellkultursystems behindert. Im Jahr 1999 gelang es Lohmann et al. HCV-Replikons zu konstruieren, die in Zellkultur replizieren. Mit Hilfe dieser Replikons, die auch die Grundlage meiner Arbeit bildeten, konnte die HCV-Forschung auf Zellkulturebene rasch voran gebracht werden. &lt;br&gt;In vorangehenden Studien wurde nachgewiesen, daß IFN-g einen hemmenden Effekt auf die HCV-Replikation hat. 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However, there is still no cure for most of them. <br>After the development of self-replicating HCV-RNAse (replicons) that amplify to high levels in the human hepatoma cell line Huh-7 it became possible to analyze the contribution of individual cytokines to the innate immune response against HCV. In further studies it was noted that interferon-gamma as interferon-alpha inhibits HCV-replicons in culture. <br>With the help of a stranded-specific northern blot analysis of positive and negative HCV-RNA, we could show that interferon-gamma inhibits the positive and the negative RNA respectively. Total RNA was prepared and levels of HCV-RNA were analyzed by northern blotting. Interferon-gamma caused a strong and dose-dependent decrease of replicon RNA levels. <br>In further experiments the antiviral activity of some interferon-gamma induced proteins was determined. The finding that neither indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO), inducible NO-synthetase (iNOS) nor GTPases inhibited the expression of HCV proteins in culture suggests that other effector proteins are responsible for interferon-gamma induced inhibition of HCV replication. <br>Tumor-necrosis-factor-alpha (TNF-alpha) is a powerful pro-inflammatory cytokine that synergistically enhances the inhibitory effect of interferon-gamma on hepatitis-B virus (HBV) gene transcription. Our results indicate that TNF-alpha does not affect the HCV-protein and –RNA synthesis nor does it synergistically enhance the inhibitory effect of interferon-gamma. Finally we demonstrated that other cytokines like inteleukine-12, -18 and LPS do not inhibit HCV replication."]},{"key":"dc:format.medium","label":"Dc Format Medium","values":["application/pdf"]},{"key":"dc:title","label":"Title","values":["Die Rolle des Interferon-g bei der Hemmung der Replikation des Hepatitis-C-Virus","The role of Interferon-g in inhibiting Hepatitis C Virus replication"]}]}],"canonical_facts":{"dc:contributor":["Haller, Otto"],"dc:creator":["Barth, Kerstin"],"dc:description.abstract":["Das Hepatitis-C-Virus ist weltweit die Hauptursache für chronische Hepatitiden, Leberzirrhosen und hepatozelluläre Karzinome. Die derzeitige Standardtherapie der Hepatitis-C besteht in einer Kombinationsbehandlung aus Peg-Interferon-a und Ribavirin. Allerdings kann mit diesen Medikamenten nur ein Teil der Patienten von der Erkrankung geheilt werden. 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Meine Experimente bestätigten die direkt antivirale Wirkung von IFN-g. <br>Mit Hilfe einer strangspezifischen Northernblotanalyse konnte gezeigt werden, daß der hemmende Einfluß des IFN-g, im Unterschied zu IFN-a, sich in gleichem Maße auf (+)- wie auf (-)-Strang-HCV-RNA auswirkte. <br>Die IFN-g-Titration in der Immunfluoreszenz, sowie die Northernblotanalyse zeigten eine dosisabhängige Inhibition der Protein- und RNA-Synthese durch dieses Zytokin. Neben IFN-g spielen auch andere Immunmodulatoren eine wichtige Rolle bei der antiviralen Abwehr. In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, daß TNF-a, welches im Mausmodell die Replikation des HBV inhibiert, die HCV-RNA-Syntheserate nicht meßbar veränderte. Auch die Interleukine-12 und -18 sowie Lipopolysaccharide nahmen keinen Einfluß auf die HCV-Proteinsynthese. <br>In weiteren Experimenten wurde die antivirale Wirkung einiger IFN-g induzierter Effektorproteine untersucht. 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However, there is still no cure for most of them. <br>After the development of self-replicating HCV-RNAse (replicons) that amplify to high levels in the human hepatoma cell line Huh-7 it became possible to analyze the contribution of individual cytokines to the innate immune response against HCV. In further studies it was noted that interferon-gamma as interferon-alpha inhibits HCV-replicons in culture. <br>With the help of a stranded-specific northern blot analysis of positive and negative HCV-RNA, we could show that interferon-gamma inhibits the positive and the negative RNA respectively. Total RNA was prepared and levels of HCV-RNA were analyzed by northern blotting. Interferon-gamma caused a strong and dose-dependent decrease of replicon RNA levels. <br>In further experiments the antiviral activity of some interferon-gamma induced proteins was determined. 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