Etablierung einer Zellkultur aus unterschiedlichen humanen Herzmuskelgeweben sowie die Simulation von verschiedenen Mangelzuständen in vitro
type: CreativeWork
description: Ziel meiner Dissertation war es, eine Zellkultur aus unterschiedlichen humanen Herzmuskelgeweben zu etablieren und verschiedene Mangelzustände in vitro zu simulieren. Dazu wurden Patienten während eines herzchirurgischen Eingriffes Probebiopsien aus verschiedenen Herzregionen entnommen. Ein Teil dieser Biopsien wurde direkt zu Gesamt-RNA aufgearbeitet, um die Genexpression unter pathologischen Umständen am Herzen nachvollziehen zu können. Durch die RT-PCR wurden spezifische Fragmente amplifiziert, die man durch die jeweiligen Primer nachwies und in der Gelelektrophorese analysierte. Die andere Hälfte der Myokardbiopsie wurde mit Kollagenase verdaut und die Zellen wurden in Kultur genommen. Nach mehrmaligem Passagieren züchtete man aus derselben Passage stammende Zellen parallel in Flaschen und auf Deckgläschen an und inkubierte für 12, 24, 48 bzw. 72 Stunden mit Medium und den jeweiligen Zusätzen (Serum, Insulin und Wachstumsfaktoren). Die Zellen in den Flaschen erntete man nach Ende des jeweiligen Induktionsversuches, RNA und Proteine wurden extrahiert und in der RT-PCR bzw. im Western-Blot analysiert. Anschließend wurde die Genexpression in der Zellkultur mit der in den Patientenproben sowie der der beiden Kontrollen verglichen. Als Positivkontrolle diente die fötale Kardiomyozyten-Zelllinie cmc 5097. Die Negativkontrolle stellten HepG2-Zellen, Zellen aus menschlichem hepatozellulärem Karzinom, dar. Die auf den Deckgläschen angezüchteten Zellen wurden ebenfalls induziert und für die Immunfluoreszenz verwandt. Es gelang, Zellen aus humanen Probebiopsien, die aus verschiedenen Herzregionen stammten, in Kultur zu nehmen und anzuzüchten. Hierbei kam es zu einem Wachstum der Vorhof-, rechts- sowie linksventrikulären Zellen in gleichem Ausmaß. Der Nachweis des Vorhandenseins von Kardiomyozyten erfolgte durch immunhistochemische Darstellung spezifischer intrazellulärer Strukturen, die Proteine des kontraktilen Materials sowie des Zytoskeletts repräsentierten. In der Immu…
abstract: Ziel meiner Dissertation war es, eine Zellkultur aus unterschiedlichen humanen Herzmuskelgeweben zu etablieren und verschiedene Mangelzustände in vitro zu simulieren. Dazu wurden Patienten während eines herzchirurgischen Eingriffes Probebiopsien aus verschiedenen Herzregionen entnommen. Ein Teil dieser Biopsien wurde direkt zu Gesamt-RNA aufgearbeitet, um die Genexpression unter pathologischen Umständen am Herzen nachvollziehen zu können. Durch die RT-PCR wurden spezifische Fragmente amplifiziert, die man durch die jeweiligen Primer nachwies und in der Gelelektrophorese analysierte. Die andere Hälfte der Myokardbiopsie wurde mit Kollagenase verdaut und die Zellen wurden in Kultur genommen. Nach mehrmaligem Passagieren züchtete man aus derselben Passage stammende Zellen parallel in Flaschen und auf Deckgläschen an und inkubierte für 12, 24, 48 bzw. 72 Stunden mit Medium und den jeweiligen Zusätzen (Serum, Insulin und Wachstumsfaktoren). Die Zellen in den Flaschen erntete man nach Ende des jeweiligen Induktionsversuches, RNA und Proteine wurden extrahiert und in der RT-PCR bzw. im Western-Blot analysiert. Anschließend wurde die Genexpression in der Zellkultur mit der in den Patientenproben sowie der der beiden Kontrollen verglichen. Als Positivkontrolle diente die fötale Kardiomyozyten-Zelllinie cmc 5097. Die Negativkontrolle stellten HepG2-Zellen, Zellen aus menschlichem hepatozellulärem Karzinom, dar. Die auf den Deckgläschen angezüchteten Zellen wurden ebenfalls induziert und für die Immunfluoreszenz verwandt. Es gelang, Zellen aus humanen Probebiopsien, die aus verschiedenen Herzregionen stammten, in Kultur zu nehmen und anzuzüchten. Hierbei kam es zu einem Wachstum der Vorhof-, rechts- sowie linksventrikulären Zellen in gleichem Ausmaß. Der Nachweis des Vorhandenseins von Kardiomyozyten erfolgte durch immunhistochemische Darstellung spezifischer intrazellulärer Strukturen, die Proteine des kontraktilen Materials sowie des Zytoskeletts repräsentierten. In der Immu…
author: Lehner, Christoph
keywords: Mangelzustand, Induktionsversuch, cell culture, heart muscle, hypoxia, coronary heart disease
date modified: 2026-07-24T02:22:10Z
provider: University of Freiburg
publisher: Networked Digital Library of Theses and Dissertations
type: WebPage
source organization: University of Freiburg