Clinical Application of S.salivarius 24SMBc in the Prevention of Recurrent Otitis Media in Paediatric Age
ABSTRACT (Italian) Introduzione. Recentemente, lo studio della microflora orale ha suscitato molto interesse al fine di sviluppare una batterioterapia mirata alla prevenzione e/o trattamento delle infezioni delle alte vie respiratorie. La cavità orale ospita alcune specie di batteri benefici come Streptococcus salivarius che è considerato un microrganismo colonizzatore 'sicuro' e predominante in questo microhabitat, in grado di promuovere una microflora orale più equilibrata e associata allo stato di benessere, interferendo con i potenziali patogeni. Questa attività antagonista è spesso mediata dalla competizione per i nutrienti, una migliore adesione alle cellule target e il rilascio di agenti bioattivi quali le batteriocine. Nel nostro laboratorio, abbiamo caratterizzato un ceppo, S.salivarius 24SMBc, isolato da bambini sani, che ha mostrato un eccellente attività inibitoria nei confronti di S.pneumoniae e S.pyogenes e una buona capacità di adesione alle cellule HEp-2. Queste proprietà ci hanno indotto a valutare una possibile applicazione di S.salivarius 24 SMBC come probiotico orale nei bambini con otite media ricorrente. Materiali e metodi. Abbiamo sequenziato il genoma di S.salivarius 24SMBc mediante pyrosequencing per verificare la presenza di fattori virulenza e determinare la presenza di geni codificanti le batteriocine che inibiscono la crescita dei patogeni descritti in precedenza. Successivamente, abbiamo incluso S.salivarius 24SMBc in un protocollo di sperimentazione clinica condotto su 17 volontari adulti sani per valutare la sicurezza di questo microrganismo nei confronti dell ospite umano e la sua capacità di colonizzare e persistere nelle alte vie respiratorie. La presenza di S.salivarius 24SMBc nel tessuto rinofaringeo è stata determinata dopo diversi intervalli di tempo in seguito alla somministrazione nasale del ceppo in studio, mediante identificazione molecolare, test dell antagonismo per valutare la produzione di batteriocine e RAPD-PCR per distinguere il genotipo di S.salivarius 24SMBc da quello di altri ceppi appartenenti alla specie S.salivarius. Lo step seguente, finalizzato alla valutazione della colonizzazione di S.salivarius 24SMBc nelle alte vie respiratorie dei bambini e della sua efficacia nel ridurre il numero di episodi di otite media, è stato realizzato attraverso uno studio pediatrico randomizzato, controllato con placebo, in doppio cieco. Questo studio ha arruolato 120 bambini con otite ricorrente ed ha previsto la ricerca di S.salivarius 24SMBc e dei ceppi responsabili di otite media dai campioni biologici, mediante identificazione fenotipica e molecolare. Inoltre, è stato determinato il livello di colonizzazione del nostro ceppo mediante qPCR, utilizzando una specifica sequenza genomica come target molecolare per identificare S.salivarius 24SMBc. Risultati e conclusioni. La sequenza del genoma ha dimostrato che S.salivarius 24SMBc è privo dei fattori di virulenza che possono ritrovarsi nel genere Streptococcus. I risultati ottenuti dagli studi clinici hanno dimostrato che il nostro ceppo batterico è sicuro per l uomo ed ha una buona capacità di colonizzare il tessuto rinofaringeo umano. La somministrazione profilattica di S.salivarius 24SMB nei bambini con una storia di otite media ricorrente, riduce gli episodi di questa malattia e anche l'incidenza di infezione da parte di alcuni agenti patogeni responsabili come S.pneumoniae e S.pyogenes. Pertanto, S.salivarius 24SMBc appare essere un microrganismo dalla localizzazione nasofaringea, competitivo e con un buon potenziale per un suo uso come probiotico orale nella prevenzione dell'otite media nei soggetti pediatrici.
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