Optimalizace izolace DNA z šípků

Plod růže šípkové (Rosa canina) nachází využití v potravinářském průmyslu, konkrétně při výrobě čajů. Plody šípku jsou bohaté na různé látky, jako např. fenolické kyseliny, které působí jako kontaminanty při izolaci rostlinné DNA. Tato práce má za cíl upravit CTAB protokol používaný k izolaci rostlinné DNA, aby výsledkem byla dostatečná koncentrace a čistota pro amplifikaci DNA. Zároveň byly sledovány rozdíly mezi izolací DNA z plodu čerstvého a sušeného. Izolační postup s opakovaným přidáním CTAB pufru s 3% polyvinylpyrrolidonem (PVP) neměl žádaný výsledek kvůli vysokému znečištění polyfenolickými látkami nebo proteiny, ale bylo zjištěno, že tato metoda je vhodná pro izolaci DNA z listu růže šípkové. K odstranění kontaminantů byl navržen postup s přidáním vyšší koncentrace PVP v první inkubaci CTAB pufrem. Konkrétně tedy 4% PVP a 5% PVP. Zvyšování koncentrací PVP mělo za důsledek zhoršení amplifikovatelnosti u sušeného plodu. Výsledky PCR a HRM analýzy ukázaly, že izolace z čerstvého plodu opakovaným přidáním CTAB pufru s 4% PVP měla lepší výsledky než použití 5% PVP. Použitím této metody jsme dosáhli identických normalizovaných křivek tání jako u pozitivní kontroly.

Grantor dc:publisher

Vysoké učení technické v Brně. Fakulta chemická

Author dc:creator

• Juhásová, Natálie

Advisor dc:contributor.advisor

• Fialová, Lenka

• Plod šípku
• kontaminace
• izolace DNA
• polymerázová řetězcová reakce (PCR)
• vysokorozlišovací analýza křivek tání (HRM analýza)
• Rosehip fruit
• contamination
• DNA isolation
• polymerase chain reaction (PCR)
• high resolution melting analysis (HRM)

Statement dc:rights

• Standardní licenční smlouva - přístup k plnému textu bez omezení

Language dc:language.iso

cs

Dc Identifier Other

162534

OAI identifier oai:identifier

oai:dspace.vut.cz:11012/251383