Viabilidade e fertilidade do sêmen equino resfriado a 5 °C por 24 horas com dois diluidores
Objetivou-se neste estudo avaliar a eficácia de dois diluidores um à base de licina-gema de ovo e outro à base de leite em pó resfriado a 5 °C por 24 horas na preservação do sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador, determinada por meio de testes in vitro e avaliação da fertilidade in vivo. No experimento 1, foram utilizados cinco ejaculados de três garanhões da raça Mangalarga Marchador, que foram divididos em dois tratamentos: Kenney - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor à base de leite (Kenney et al., 1975); Foote - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor de glicina-gema de ovo (Foote, 2002). Amostras de 12 mL de sêmen foram diluídas numa concentração de 30 x 106 espermatozoides viáveis/mL e, depois, armazenadas em Equitainer® por 24 horas. A qualidade seminal foi avaliada após diluição e resfriamento do sêmen. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva; vigor espermático; morfologia espermática; integridade da membrana plasmática pelo teste supravital e da epifluorescência utilizando os corantes diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídeo; funcionalidade da membrana plasmática pelo teste hiposmótico; e motilidade progressiva e vigor espermáticos durante o teste de termorresistência por 90 minutos. O vigor espermático do sêmen diluído com Kenney foi superior (P<0,05) ao do Foote na avaliação do sêmen fresco diluído. Não houve diferença estatística entre as demais características seminais avaliadas no sêmen fresco diluído. No sêmen resfriado, o Kenney propiciou a manutenção da motilidade e do vigor espermático após as 24 horas de armazenamento, porém o Foote apresentou maiores valores médios (P<0,05) para porcentagem de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico e viáveis pelo teste de epifluorescência. Os valores médios da motilidade progressiva e do vigor espermático durante os testes de termorresistência do sêmen resfriado foram inferiores ao preconizado pelo CBRA (1998) aos 30 minutos com o diluidor de Foote e aos 60 minutos com o dilluidor Kenney. No experimento 2, avaliou-se a fertilidade do sêmen resfriado com ambos os diluidores. Foram realizadas 17 coletas do sêmen do garanhão 1 e 23 coletas do garanhão 2. Após as coletas, o sêmen foi diluído com os diluidores utilizados no experimento 1 e ajustado para uma dose inseminante de 500 milhões de espermatozoides viáveis num volume final de 15 mL por dose. O sêmen foi acondicionado no Equitainer®, resfriado até 5 oC e armazenado por no mínimo 24 horas. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva e vigor espermático do sêmen diluído e resfriado; e morfologia espermática do sêmen fresco e resfriado com ambos os diluidores. Foram utilizados 31 ciclos estrais de 26 éguas no primeiro período experimental e 43 ciclos de 28 éguas no segundo período experimental. Após a detecção de folículo de 30 mm, as éguas foram distribuídas ao acaso em dois grupos: grupo A (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Kenney) e grupo B (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Foote). O sêmen dos garanhões foi utilizado aleatoriamente entre as éguas. As inseminações foram realizadas depois de no mínimo 24 horas de armazenamento do sêmen. O sêmen foi depositado no corpo do útero, a partir da detecção de um folículo de 30-40 mm até a observação da ovulação. As inseminações foram feitas somente em dias predeterminados (terça-feira, quinta-feira e sábado) e o diagnóstico de gestação foi realizado por meio de ultrassonografia transretal. O diluidor de Kenney se mostrou superior ao Foote na manutenção da motilidade progressiva e do vigor espermático após o período de resfriamento. A taxa de gestação do grupo A, 55,26% (21/38), foi maior (P<0,05) que a do grupo B, 30,56% (11/36). Os testes de avaliação da integridade e funcionalidade da membrana plasmática da célula espermática auxiliam na predição do potencial fecundante do garanhão, porém ainda não são conclusivos. O diluidor seminal à base de glicina-gema de ovo (Foote, 2002) não é eficaz em preservar as características seminais e não possibilita obter índice de fertilidade aceitável. O diluidor proposto por Kenney et al. (1975) ainda é uma ótima opção para inseminação artificial com sêmen resfriado de garanhões da raça Mangalarga Marchador.
Inseminação artificial, Garanhões, Criopreservação, Artificial insemination, Stallion, Criopreservation
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