RNAi em Colletotrichum lindemuthianum: caracterização das proteínas-chave e desafios para a aplicação
O agente etiológico da antracnose, uma das principais doenças do feijão-comum (Phaseolus vulgaris L.), é o fungo Colletotrichum lindemuthianum. Devido à alta variabilidade genética do patógeno e as limitações das estratégias convencionais de controle, como o uso de cultivares resistentes e fungicidas, torna-se necessário o desenvolvimento de novas abordagens eficientes e sustentáveis. Neste contexto, o RNA de interferência (RNAi) surge como uma alternativa promissora, permitindo o silenciamento de genes essenciais para a patogenicidade do fungo. Com isso, o presente estudo teve como objetivos: caracterizar os principais componentes da maquinaria de RNAi em C. lindemuthianum; avaliar a expressão dos genes-chave durante a interação com o feijão-comum; investigar a capacidade do fungo de captar dsRNAs exógenos; e silenciar genes-alvo quando aplicados por pulverização (SIGS). A análise do genoma de C. lindemuthianum permitiu identificar proteínas- chave da maquinaria de RNAi, incluindo duas Argonautas (AGO), duas Dicer-like (DCL) e três RNA polimerases dependentes de RNA (RdRPs). Dentre essas, ClAGO2, ClRdRP2 e ClRdRP3 foram descritas pela primeira vez na espécie. Todas as proteínas apresentaram domínios altamente conservados, e a análise filogenética indica que os genes que as codificam foram mantidos nos genomas, com maior proximidade entre espécies do mesmo complexo taxonômico do gênero Colletotrichum. A expressão dos genes AGO1, RdRP3 e DCL1 do fungo na interação com a planta variou ao longo do tempo e da linhagem avaliada. Foram obtidos 18 e 180 transformantes de C. lindemuthianum e C. truncatum, respectivamente, expressando GFP. A produção de dsRNAs apresentou baixo rendimento em dois métodos testados (in vivo e in vitro), resultando em uma média de 12,2 µg de dsRNA sintetizado pelo kit comercial. Os ensaios de captação de dsRNA por microcultivo indicaram que C. lindemuthianum é capaz de perceber dsRNAs exógenos, com aumento no número e tamanho de vacúolos, porém os resultados foram inconclusivos quanto a absorção. A pulverização dos dsRNAs direcionados a ClSGE1 (regulador transcricional putativo) e ClpacC (regulador transcricional em resposta ao pH) a 4 ng.µL-1 não foram capazes de controlar a antracnose no feijão-comum nas condições avaliadas. Dessa forma, foi possível caracterizar as proteínas envolvidas no mecanismo de RNAi e demonstrar que C. lindemuthianum é capaz de perceber dsRNAs exógenos, abrindo caminho para futuros testes de captação. Além disso, este estudo contribui para a compreensão dos desafios associados a padronização e o uso de dsRNA como estratégia de controle de fitopatógenos e inicia as investigações desse método para C. lindemuthianum. Palavras-chave: RNAi; Antracnose; Feijão-comum; SIGS.
Feijão - Doenças e pragas, Antracnose - Controle, Fungicidas, Pulverização e polvilhação na agricultura
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