Estudo do modo de interação do fármaco cloroquina com o DNA e seu efeito em células
O estudo das interações entre a molécula de DNA e fármacos tem sido de extrema rele- vância para se compreender as peculiaridades intrínsecas dessas interações. Apesar dos diversos avanços cientíĄcos e t ecnológicos, o s m ecanismos d e a ção m olecular d e alguns fármacos permanecem desconhecidos, principalmente no que diz respeito às interações in- trínsecas desses compostos com componentes celulares como proteínas e ácidos nucleicos. A cloroquina (CLQ) é um composto amplamente usado no tratamento contra a malária. No início de 2020, alguns estudos mostraram que esse agente antimalarial poderia ser uma alternativa no enfrentamento da pandemia da COVID-19. Contudo, muitos aspectos da interação entre a molécula de DNA e a cloroquina ainda são desconhecidos. Nesta tese o estudo do fármaco cloroquina foi realizado em dois diferentes níveis: (i) nível de molé- cula única usando a técnica de Pinça Óptica (OT) para analisar os modos de interação do complexo DNA-CLQ. Esse tipo de estudo é reconhecido como estado da arte para caracterizar as interações do DNA com ligantes como fármacos ou proteínas, e permite determinar os modos de ligação e os parâmetros físico-químicos das interações; (ii) nível celular através de ensaios de citotoxicidade da cloroquina em três tipos distintos de linhas celulares normais, HEK-293 (células renais humanas), melan-a (células epiteliais murina) e VERO (células renais de primata), que permite avaliar e comparar os efeitos do fár- maco na viabilidade celular. A citotoxicidade é um dos indicadores mais importantes de avaliação biológica em estudos in vitro, sendo que a viabilidade celular é um dos aspectos mais relevantes para compreender os mecanismos de resposta das células após exposição a agentes tóxicos. Os resultados obtidos são intrigantes. Dos ensaios de pinçamento óptico observamos que a CLQ tem forte aĄnidade com a molécula de DNA, mas os detalhes intrínsecos dos mecanismos de interação dependem da força iônica do meio circundante, que pode alterar o modo de ligação entre as duas moléculas. Dos ensaios de citotoxici- dade observamos que a CLQ possui alta toxicidade nas três linhagens celulares testadas, de maneira que a linhagem HEK-293 possui maior sensibilidade ao fármaco, apresentando dois valores de concentração inibitória média (IC 50 ). Esse comportamento apresentado pela linhagem HEK-293 é conhecido como efeito hormético, que é induzido pelo fármaco. Esses resultados contribuem para o melhor entendimento tanto a nível molecular quanto celular da ação da cloroquina e pode auxiliar estudos posteriores. Palavras-chave: Cloroquina. Pinça óptica. Ligantes. Cultura de células.
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