Obtenção e avaliação de proteases do fungo nematófago Monacrosporium thaumasium a partir de nanopartículas de prata sobre massas ovígeras do molusco Biomphalaria glabrata e sua análise por pinçamento óptico
Fungos nematófagos têm sido utilizados amplamente para controle biológico, tanto em helmintos, quanto em hospedeiros intermediários. Dentre os agentes envolvidos na dispersão da doença esquistossomose, estão os caramujos aquáticos do gênero Biomphalaria, que são frequentemente acometidos pelo trematódeo Schistosoma mansoni e são responsáveis por grandes danos à saúde de animais e humanos, tornando-se um grande fator de importância médico-veterinária. Como alternativa para controlar esses helmintos, fungos predadores e ovicidas são considerados oponentes naturais e essenciais para tal controle. Este trabalho, portanto, tem por objetivo investigar o potencial fungo Monacrosporium thaumasium como agente de biossíntese de nanopartículas de prata (AgNPs) e interação de proteases à nível molecular e suas conformações na macromolécula de ácido desoxirribonucleico (DNA). Foram testadas as atividades do extrato bruto e da protease parcialmente purificada provenientes de um isolado de M. thaumasium (cepa NF34) associado com nitrato de prata (AgNO 3 ) sobre massas ovígeras de Biomphalaria glabrata, como modelo teste de embriotoxicidade. O experimento foi edificado em delineamento inteiramente casualizado em tratamentos contendo as AgNPs (proporções entre 0,5 mL e 1:1 mL + massas ovígeras expostas) e o grupo controle com água declorada. Ambos os grupos foram mantidos nas condições na temperatura de 25 ºC durante dez dias. Sobre a molécula de DNA, foi feita a purificação parcial do extrato bruto do fungo e aplicado à técnica de pinça óptica (PO), a fim de se de estudar sobre as possíveis interações dessas proteases à esta molécula. Obteve-se das caracterizações enzimáticas, maior atividade proteolítica até 60 ºC em pH 9 durante 25 minutos. As serino-proteases parcialmente purificadas foram verificadas em sistema de gel SDS-PAGE tricina na massa molecular de aproximadamente 40 kDa e as proteases se ligaram fortemente ao ácido desoxirribonucleico, formando o complexo serino protease - DNA. Como conclusão, essas proteases, apresentaram uma constante de associação de ligação de equilíbrio ~10 8 M -1 e um comportamento cooperativo positivo na forma de agregados ligados, com tendência a neutralizar cerca de 100% da carga negativa presente no esqueleto fosfato da dupla hélice, resultando em complexos DNA-proteínas neutras. Os resultados obtidos evidenciam que M. thaumasium é um organismo satisfatório na produção de biossíntese de nanopartículas e ocasionou nas massas ovígeras expostas à inibição de 100% dos caramujos. Logo, as proteases foram importantes nesse tipo de caracterização para elucidar os aspectos moleculares do mecanismo de ação dessa proteína, que pode trazer pistas sobre seu papel como agentes antipatógenos e, assim, contribuir para aprimorar o conhecimento no uso de tais macromoléculas biológicas e possíveis estudos futuros sobre aplicabilidades em programas de controle biológico. Palavras-chave: Biotecnologia. Controle biológico. Gastrópodes. Nanomateriais. Trematodíases. Pinça óptica.
Helmintologia veterinária, Fungos nematófagos, Controle biológico, Gastrópodes, Biotecnologia, Nanopartículas, Trematoda
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