Caracterização dos cromossomos de maracujá (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) com Giemsa, laranja de acridina e FISH
Passiflora edulis f. flavicarpa é considerada a espécie mais importante do gênero Passiflora, principalmente pelo seu interesse botânico, comercial e em programas de melhoramento. Análises citogenéticas desta espécie revelaram número cromossômico de 2n=18, porém, a caracterização de seus cromossomos tem sido apresentada na literatura com dados conflitantes quanto à posição do centrômero, ao número e localização de constrições secundárias e de regiões organizadoras de nucléolo (RONs). Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi adaptar metodologias que ampliassem a resolução das análises cromossômicas em P. edulis f. flavicarpa. Mais especificamente, aplicar técnicas citogenéticas convencionais e moleculares para determinar os aspectos morfológicos dos cromossomos e identificar as RONs. Os meristemas radiculares foram pré-tratados com o bloqueador mitótico Amiprofos metil (APM), 3 μM, durante um período de 16 horas à 4 oC e fixados. As preparações citogenéticas foram realizadas pela técnica de dissociação celular e secagem ao ar e submetidas à coloração convencional com Giemsa, à coloração com o fluorocromo laranja de acridina e à metodologia de FISH (Fluorescent in Situ Hybridization). As figuras cromossômicas foram observadas com objetiva de imersão e capturadas diretamente por uma videocâmera acoplada ao microscópio e a um computador. O bloqueador mitótico utilizado, juntamente com a técnica aplicada, proporcionou acúmulo de células prometafásicas e metafásicas adequadas para análise. Visualizaram-se nove pares de cromossomos bem espalhados nas lâminas, sem sobreposição e com constrições primárias e secundárias definidas, facilitando assim a montagem dos cariogramas. As análises do cariótipo revelaram comprimento médio dos cromossomos metafásicos de 3,75 μm (par 1) a 2,20 μm (par 9) e razões de braços indicando que os cromossomos de 2 a 7 são metacêntricos e o 1, 8 e 9 são submetacêntricos. Observou-se a presença de constrição secundária na porção subterminal do braço longo dos cromossomos 1 e 8 e porção subterminal do braço curto dos cromossomos 2 e 7, sendo que, na literatura, o número dessas constrições variou de um a três em preparações obtidas pela técnica de esmagamento. Com o fluorocromo laranja de acridina, foram observadas regiões emitindo fluorescência verde-amarelada no braço curto do cromossomo 7 e no braço longo do cromossomo 8, evidenciando dois cromossomos que apresentaram constrição secundária. A técnica de FISH, com a utilização de sonda de rDNA 18S, revelou quatro marcações fluorescentes em núcleos interfásicos e marcações fluorescentes nos mesmos pares cromossômicos marcados com laranja de acridina, em metáfase. As marcações obtidas com o fluorocromo correspondem em número e localização dos sítios de rDNA 18S, indicando que somente duas das quatro constrições secundárias encontradas com a coloração de Giemsa estão relacionadas com RON. Assim, considerando que diferenças intraespecíficas e de ecotipos não estejam envolvidas nas diferenças morfológicas pesquisadas, as metodologias aplicadas corroboraram a ampliação da resolução do cariótipo de P. edulis f. flavicarpa. Evidenciou-se, portanto, diferenças na posição do centrômero, número e localização das constrições secundárias e das RONs, quando comparadas aos resultados encontrados na literatura.
Maracujá – Citogenética, Maracujá – Cromossomos – Bandeamento, Maracujá – Cromossomos – Morfologia
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