Identificação de parceiros funcionais e propriedades do fator EIF4E5, homólogo do fator de iniciação da tradução EIF4E (EIF4E5) de Leishmania infantum
Na tradução em eucariotos, a etapa de iniciação requer a cooperação de fatores proteicos que auxiliam as subunidades ribossomais na sua função. Dentre esses, destaca-se o complexo eIF4F, onde a subunidade eIF4E é a responsável pelo reconhecimento dos mRNAs por meio de sua extremidade 5 Nos tripanossomatídeos, protozoários parasitas de importância médica, sua expressão gênica é regulada pós-transcricionalmente e durante a tradução. Nesse contexto, múltiplos homólogos de eIF4E foram identificados nestes organismos com possível função na regulação da tradução. Dentre esses, os EIF4E5 e EIF4E6 ainda não foram descritos formalmente em Leishmania e o estudo do EIF4E5 foi o objetivo deste trabalho. Para isso, construções plasmidiais foram inicialmente geradas para a expressão da proteína nativa e mutantes em Leishmania infantum. Foi visto que a superexpressão do EIF4E5 se dá em diferentes fases de crescimento da L. infantum. Sua distribuição subcelular, determinada por imunofluorescência, ocorre por todo o citoplasma e sua superexpressão leva a alterações morfológicas no parasita. Ensaios de imunoprecipitação e espectrometria de massas revelaram que o EIF4E5 interage especificadamente com o EIF4G1, homólogo de outra subunidade do complexo eIF4F, o eIF4G. Outras interações com proteínas de modificação de mRNAs e ligadas a vias de sinalização também foram identificadas, mas várias destas interações foram abolidas quando foi mutado um resíduo de triptofano conservado no EIF4E5. Sendo assim, este trabalho revelou aspectos inéditos relacionados à função desta proteína nos tripanossomatídeos.
CAVALCANTI, Thaíse Yasmine Vasconcelos de Lima
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