{"id":{"repo_id":"athens","oai_identifier":"oai:lib.uoa.gr:uoadl:5375233"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/athens/oai:lib.uoa.gr:uoadl:5375233","repository":{"repo_id":"athens","name":"National and Kapodistrian University of Athens","base_url":"https://pergamos.lib.uoa.gr/uoa/dl/frontend/oaipmh"},"display":{"title":"Μελέτη της έκφρασης και ρύθμισης της L-Dopa Αποκαρβοξυλάσης σε Bιοχημικούς μηχανισμούς Νευροεκφυλισμού","abstract":"Η παρούσα ερευνητική εργασία εκπονήθηκε στην Ερευνητική Μονάδα Ι του Τομέα Βιοχημείας και Μοριακής Βιολογίας του Τμήματος Βιολογίας, υπό την επίβλεψη της αναπληρώτριας καθηγήτριας Δρ. Διδώ Βασιλακοπούλου και του μέλους ΕΔΙΠ, Δρ. Νικόλαου Αρβανίτη. Εντάσσεται στα πλαίσια του μαθήματος «Διπλωματική Εργασία» του προγράμματος μεταπτυχιακών σπουδών «Κλινική Βιοχημεία – Μοριακή Διαγνωστική » του Τμήματος Βιολογίας του Εθνικού και Καποδιστριακού Πανεπιστημίου Αθηνών. Η ερευνητική μας ομάδα μέχρι τώρα έχει δείξει με τη μελέτη του μορίου της L-DOPA αποκαρβοξυλάσης ότι συμμετέχει τόσο στον αποπτωτικό θάνατο όσο και σε διεργασίες κυτταροτοξικότητας . Πρόσφατα δεδομένα της ερευνητικής μας ομάδας, έδειξαν τη σχέση της έκφρασης της L-DOPA αποκαρβοξυλάσης με την οξειδωτική καταπόνηση. Ακόμη και σε υψηλές ποσότητες Η2Ο2 τα αποτελέσματά μας με qPCR επέδειξαν αύξηση και στα επίπεδα έκφρασης του mRNA της DDC (Lotsios et al. 2023). Για την επίτευξη αυτού του στόχου επιλέχθηκαν δύο κυτταρικές σειρές, οι CHO και CHO-DDC. Τα κύτταρα CHO αποτελούν μοντέλα έρευνας για τη δράση των κατεχολαμινών, καθώς δεν εκφράζουν τις πρωτεΐνες-μεταφορείς τους (Costello et al. 2012; Percy et al. 1999). Η κυτταρική σειρά CHO-DDC δημιουργήθηκε στο εργαστήριο της κυρίας Βασιλακοπούλου, όπου κύτταρα CHO επιμολύνθηκαν με το cDNA της ανθρώπινης L-DOPA αποκαρβοξυλάσης πλήρους μήκους. Η DDC έχει πολυάριθμες ισομορφές και καταφέραμε να απομονώσουμε την L-DOPA αποκαρβοξυλάση πλήρους μήκους με την οποία πραγματοποιήθηκε επιμόλυνση στην κυτταρική σειρά CHO. Προς αυτή την κατεύθυνση, ο ερευνητικός στόχος ήταν να μελετήσουμε το φαινόμενο της συσχέτισης της έκφρασης της DDC με την οξειδωτική καταπόνηση ως σύστημα το οποίο έχει αναπτυχθεί στο εργαστήριο μας. Πρώτο βήμα της πειραματικής πορείας αποτέλεσε η εξακρίβωση της συμμετοχής αυξανόμενων συγκεντρώσεων H2O2 στην επαγωγή οξειδωτικού στρες στις επιλεγμένες κυτταρικές σειρές. Πραγματοποιήθηκαν πειράματα ποσοτικού προσδιορισμού κυτταροτοξικότητας σε κυτταρικές καλλιέργειες που είχαν αναπτυχθεί για συγκεκριμένο χρονικό διάστημα παρουσία αυξανόμενων συγκεντρώσεων H2O2, με απώτερο σκοπό τον προσδιορισμό των διαφορών στις τιμές κυτταρικού θανάτου συναρτήσει της αύξησης της συγκέντρωσης του οξειδωτικού παράγοντα. Αφού επιβεβαιώθηκε η σχέση του H2O2 στην επαγωγή οξειδωτικών συνθηκών, μελετήθηκε το πρότυπο πρωτεϊνικής έκφρασης του μορίου της DDC, κάτω από αυτές τις συνθήκες Ο προσδιορισμός πραγματοποιήθηκε μέσω ανοσοστύπωσης κατά Western. Σκοπός της πειραματικής πορείας ήταν ο εντοπισμός τυχών μεταβολών στην ποσοτική έκφραση της πρωτεΐνης καθώς και στο πρότυπο αποικοδόμησής της. Εκτός από το H2O2 οι δυο παραπάνω κυτταρικές σειρές εκτέθηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις ρυθμιστικών παραγόντων του ενζύμου της DDC όπως ο αναστολέας Carbidopa και ο νευροδιαβιβαστής ντοπαμίνη . Μελετήθηκε τόσο η κυτταροτοξικότητα όσο και το πρότυπο πρωτεϊνικής έκφρασης του μορίου της DDC. Ακολούθησε προσθήκη H2O2 ως οξειδωτικό παράγοντα μαζί με ρυθμιστικό παράγοντα της DDC σε κάθε κυτταρική σειρά ώστε να διερευνηθεί η κυτταροτοξικότητα και η πρωτεϊνική έκφραση όταν συνυπάρχουν και οι δυο παράγοντες. Σκοπός της παρούσας ερευνητικής εργασίας είναι η συσχέτιση όλων των προαναφερθέντων δεδομένων προς τη διαλεύκανση του ρόλου της DDC στην ανάπτυξη του οξειδωτικού στρες .","abstract_html":"Η παρούσα ερευνητική εργασία εκπονήθηκε στην Ερευνητική Μονάδα Ι του Τομέα Βιοχημείας και Μοριακής Βιολογίας του Τμήματος Βιολογίας, υπό την επίβλεψη της αναπληρώτριας καθηγήτριας Δρ. Διδώ Βασιλακοπούλου και του μέλους ΕΔΙΠ, Δρ. Νικόλαου Αρβανίτη. Εντάσσεται στα πλαίσια του μαθήματος «Διπλωματική Εργασία» του προγράμματος μεταπτυχιακών σπουδών «Κλινική Βιοχημεία – Μοριακή Διαγνωστική » του Τμήματος Βιολογίας του Εθνικού και Καποδιστριακού Πανεπιστημίου Αθηνών. Η ερευνητική μας ομάδα μέχρι τώρα έχει δείξει με τη μελέτη του μορίου της L-DOPA αποκαρβοξυλάσης ότι συμμετέχει τόσο στον αποπτωτικό θάνατο όσο και σε διεργασίες κυτταροτοξικότητας . Πρόσφατα δεδομένα της ερευνητικής μας ομάδας, έδειξαν τη σχέση της έκφρασης της L-DOPA αποκαρβοξυλάσης με την οξειδωτική καταπόνηση. Ακόμη και σε υψηλές ποσότητες Η2Ο2 τα αποτελέσματά μας με qPCR επέδειξαν αύξηση και στα επίπεδα έκφρασης του mRNA της DDC (Lotsios et al. 2023). Για την επίτευξη αυτού του στόχου επιλέχθηκαν δύο κυτταρικές σειρές, οι CHO και CHO-DDC. Τα κύτταρα CHO αποτελούν μοντέλα έρευνας για τη δράση των κατεχολαμινών, καθώς δεν εκφράζουν τις πρωτεΐνες-μεταφορείς τους (Costello et al. 2012; Percy et al. 1999). Η κυτταρική σειρά CHO-DDC δημιουργήθηκε στο εργαστήριο της κυρίας Βασιλακοπούλου, όπου κύτταρα CHO επιμολύνθηκαν με το cDNA της ανθρώπινης L-DOPA αποκαρβοξυλάσης πλήρους μήκους. Η DDC έχει πολυάριθμες ισομορφές και καταφέραμε να απομονώσουμε την L-DOPA αποκαρβοξυλάση πλήρους μήκους με την οποία πραγματοποιήθηκε επιμόλυνση στην κυτταρική σειρά CHO. Προς αυτή την κατεύθυνση, ο ερευνητικός στόχος ήταν να μελετήσουμε το φαινόμενο της συσχέτισης της έκφρασης της DDC με την οξειδωτική καταπόνηση ως σύστημα το οποίο έχει αναπτυχθεί στο εργαστήριο μας. Πρώτο βήμα της πειραματικής πορείας αποτέλεσε η εξακρίβωση της συμμετοχής αυξανόμενων συγκεντρώσεων H2O2 στην επαγωγή οξειδωτικού στρες στις επιλεγμένες κυτταρικές σειρές. Πραγματοποιήθηκαν πειράματα ποσοτικού προσδιορισμού κυτταροτοξικότητας σε κυτταρικές καλλιέργειες που είχαν αναπτυχθεί για συγκεκριμένο χρονικό διάστημα παρουσία αυξανόμενων συγκεντρώσεων H2O2, με απώτερο σκοπό τον προσδιορισμό των διαφορών στις τιμές κυτταρικού θανάτου συναρτήσει της αύξησης της συγκέντρωσης του οξειδωτικού παράγοντα. Αφού επιβεβαιώθηκε η σχέση του H2O2 στην επαγωγή οξειδωτικών συνθηκών, μελετήθηκε το πρότυπο πρωτεϊνικής έκφρασης του μορίου της DDC, κάτω από αυτές τις συνθήκες Ο προσδιορισμός πραγματοποιήθηκε μέσω ανοσοστύπωσης κατά Western. Σκοπός της πειραματικής πορείας ήταν ο εντοπισμός τυχών μεταβολών στην ποσοτική έκφραση της πρωτεΐνης καθώς και στο πρότυπο αποικοδόμησής της. Εκτός από το H2O2 οι δυο παραπάνω κυτταρικές σειρές εκτέθηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις ρυθμιστικών παραγόντων του ενζύμου της DDC όπως ο αναστολέας Carbidopa και ο νευροδιαβιβαστής ντοπαμίνη . Μελετήθηκε τόσο η κυτταροτοξικότητα όσο και το πρότυπο πρωτεϊνικής έκφρασης του μορίου της DDC. Ακολούθησε προσθήκη H2O2 ως οξειδωτικό παράγοντα μαζί με ρυθμιστικό παράγοντα της DDC σε κάθε κυτταρική σειρά ώστε να διερευνηθεί η κυτταροτοξικότητα και η πρωτεϊνική έκφραση όταν συνυπάρχουν και οι δυο παράγοντες. Σκοπός της παρούσας ερευνητικής εργασίας είναι η συσχέτιση όλων των προαναφερθέντων δεδομένων προς τη διαλεύκανση του ρόλου της DDC στην ανάπτυξη του οξειδωτικού στρες .","abstract_has_math":false,"creators":["ΔΗΜΗΤΡΙΟΥ ΑΦΡΟΔΙΤΗ","DIMITRIOU AFRODITI"],"institution":null,"degree_name":null,"degree_level":null,"degree_discipline":null,"degree_department":null,"school":null,"contributors":[],"advisors":[],"committee_chairs":[],"committee_members":[],"year":2026,"date_issued":"2026","date_published":"2026","updated_at":"2026-07-24T01:02:21Z","subjects":["Θετικές Επιστήμες","Science"],"languages":["Ελληνικά","Greek"],"rights":[],"rights_urls":[],"identifier_entries":[{"key":"dc:identifier","label":"Identifier","values":["uoadl:5375233"],"render_values":[{"text":"uoadl:5375233","href":null,"code":true}]}]},"links":{"outbound_url":"https://pergamos.lib.uoa.gr/uoa/dl/object/5375233","outbound_label":"Repository record","outbound_source":"dc:identifier"},"metadata_groups":[{"id":"people","label":"People","entries":[{"key":"dc:creator","label":"Author","values":["ΔΗΜΗΤΡΙΟΥ ΑΦΡΟΔΙΤΗ","DIMITRIOU AFRODITI"]}]},{"id":"academic_context","label":"Academic Context","entries":[{"key":"dc:date","label":"Dc Date","values":["2026"]},{"key":"dc:type","label":"Dc Type","values":["born_digital_postgraduate_thesis","Διπλωματική Εργασία","Postgraduate Thesis"]}]},{"id":"subjects_keywords","label":"Subjects and Keywords","entries":[{"key":"dc:subject","label":"Dc Subject","values":["Θετικές Επιστήμες","Science"]}]},{"id":"language_rights","label":"Language and Rights","entries":[{"key":"dc:language","label":"Dc Language","values":["Ελληνικά","Greek"]}]},{"id":"identifiers","label":"Identifiers","entries":[{"key":"dc:identifier","label":"Identifier","values":["uoadl:5375233","https://pergamos.lib.uoa.gr/uoa/dl/object/5375233"]}]},{"id":"additional","label":"Additional Metadata","entries":[{"key":"dc:description","label":"Description","values":["Η παρούσα ερευνητική εργασία εκπονήθηκε στην Ερευνητική Μονάδα Ι του Τομέα Βιοχημείας και Μοριακής Βιολογίας του Τμήματος Βιολογίας, υπό την επίβλεψη της αναπληρώτριας καθηγήτριας Δρ. Διδώ Βασιλακοπούλου και του μέλους ΕΔΙΠ, Δρ. Νικόλαου Αρβανίτη. Εντάσσεται στα πλαίσια του μαθήματος «Διπλωματική Εργασία» του προγράμματος μεταπτυχιακών σπουδών «Κλινική Βιοχημεία – Μοριακή Διαγνωστική » του Τμήματος Βιολογίας του Εθνικού και Καποδιστριακού Πανεπιστημίου Αθηνών. Η ερευνητική μας ομάδα μέχρι τώρα έχει δείξει με τη μελέτη του μορίου της L-DOPA αποκαρβοξυλάσης ότι συμμετέχει τόσο στον αποπτωτικό θάνατο όσο και σε διεργασίες κυτταροτοξικότητας . Πρόσφατα δεδομένα της ερευνητικής μας ομάδας, έδειξαν τη σχέση της έκφρασης της L-DOPA αποκαρβοξυλάσης με την οξειδωτική καταπόνηση. Ακόμη και σε υψηλές ποσότητες Η2Ο2 τα αποτελέσματά μας με qPCR επέδειξαν αύξηση και στα επίπεδα έκφρασης του mRNA της DDC (Lotsios et al. 2023). Για την επίτευξη αυτού του στόχου επιλέχθηκαν δύο κυτταρικές σειρές, οι CHO και CHO-DDC. Τα κύτταρα CHO αποτελούν μοντέλα έρευνας για τη δράση των κατεχολαμινών, καθώς δεν εκφράζουν τις πρωτεΐνες-μεταφορείς τους (Costello et al. 2012; Percy et al. 1999). Η κυτταρική σειρά CHO-DDC δημιουργήθηκε στο εργαστήριο της κυρίας Βασιλακοπούλου, όπου κύτταρα CHO επιμολύνθηκαν με το cDNA της ανθρώπινης L-DOPA αποκαρβοξυλάσης πλήρους μήκους. Η DDC έχει πολυάριθμες ισομορφές και καταφέραμε να απομονώσουμε την L-DOPA αποκαρβοξυλάση πλήρους μήκους με την οποία πραγματοποιήθηκε επιμόλυνση στην κυτταρική σειρά CHO. Προς αυτή την κατεύθυνση, ο ερευνητικός στόχος ήταν να μελετήσουμε το φαινόμενο της συσχέτισης της έκφρασης της DDC με την οξειδωτική καταπόνηση ως σύστημα το οποίο έχει αναπτυχθεί στο εργαστήριο μας. Πρώτο βήμα της πειραματικής πορείας αποτέλεσε η εξακρίβωση της συμμετοχής αυξανόμενων συγκεντρώσεων H2O2 στην επαγωγή οξειδωτικού στρες στις επιλεγμένες κυτταρικές σειρές. Πραγματοποιήθηκαν πειράματα ποσοτικού προσδιορισμού κυτταροτοξικότητας σε κυτταρικές καλλιέργειες που είχαν αναπτυχθεί για συγκεκριμένο χρονικό διάστημα παρουσία αυξανόμενων συγκεντρώσεων H2O2, με απώτερο σκοπό τον προσδιορισμό των διαφορών στις τιμές κυτταρικού θανάτου συναρτήσει της αύξησης της συγκέντρωσης του οξειδωτικού παράγοντα. Αφού επιβεβαιώθηκε η σχέση του H2O2 στην επαγωγή οξειδωτικών συνθηκών, μελετήθηκε το πρότυπο πρωτεϊνικής έκφρασης του μορίου της DDC, κάτω από αυτές τις συνθήκες Ο προσδιορισμός πραγματοποιήθηκε μέσω ανοσοστύπωσης κατά Western. Σκοπός της πειραματικής πορείας ήταν ο εντοπισμός τυχών μεταβολών στην ποσοτική έκφραση της πρωτεΐνης καθώς και στο πρότυπο αποικοδόμησής της. Εκτός από το H2O2 οι δυο παραπάνω κυτταρικές σειρές εκτέθηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις ρυθμιστικών παραγόντων του ενζύμου της DDC όπως ο αναστολέας Carbidopa και ο νευροδιαβιβαστής ντοπαμίνη . Μελετήθηκε τόσο η κυτταροτοξικότητα όσο και το πρότυπο πρωτεϊνικής έκφρασης του μορίου της DDC. Ακολούθησε προσθήκη H2O2 ως οξειδωτικό παράγοντα μαζί με ρυθμιστικό παράγοντα της DDC σε κάθε κυτταρική σειρά ώστε να διερευνηθεί η κυτταροτοξικότητα και η πρωτεϊνική έκφραση όταν συνυπάρχουν και οι δυο παράγοντες. Σκοπός της παρούσας ερευνητικής εργασίας είναι η συσχέτιση όλων των προαναφερθέντων δεδομένων προς τη διαλεύκανση του ρόλου της DDC στην ανάπτυξη του οξειδωτικού στρες .","This research work was carried out in Research Unit I of the Biochemistry and Molecular Biology Sector of the Department of Biology, under the supervision of Associate Professor Dr. Dido Vasilakopoulou and EDIP member Dr. Nikolaos Arvanitis.t is part of the "Diploma Thesis" course of the postgraduate study program "Clinical Biochemistry - Molecular Diagnostics" of the Department of Biology of the National and Kapodistrian University of Athens.Our research group has so far shown through the study of the L-DOPA decarboxylase molecule that it participates in both apoptotic death and cytotoxicity processes.Recent data from our research group have shown the relationship between L-DOPA decarboxylase expression and oxidative stress. Even at high amounts of H2O2, our qPCR results also showed an increase in DDC mRNA expression levels To achieve this goal, two cell lines were selected, CHO and CHO-DDC. CHO cells are models for research on the action of catecholamines, as they do not express their transporter proteins.The CHO-DDC cell line was created in Ms. Vasilakopoulou's laboratory, where CHO cells were transfected with the full-length human L-DOPA decarboxylase cDNA.DDC has numerous isoforms and we were able to isolate the full-length L-DOPA decarboxylase with which we transfected the CHO cell line.In this direction, the research goal was to study the phenomenon of the correlation of DDC expression with oxidative stress as a system that has been developed in our laboratory.he first step of the experimental process was to verify the participation of increasing concentrations of H2O2 in the induction of oxidative stress in the selected cell lines.Quantitative cytotoxicity assay experiments were performed on cell cultures that had been grown for a specific period of time in the presence of increasing concentrations of H2O2, with the ultimate aim of determining the differences in cell death rates as a function of the increasing concentration of the oxidizing agent.After confirming the role of H2O2 in the induction of oxidative conditions, the protein expression pattern of the DDC molecule was studied under these conditions.The determination was performed by Western immunoblotting. The aim of the experimental procedure was to identify any changes in the quantitative expression of the protein as well as in its degradation pattern.In addition to H2O2, the two above cell lines were exposed to increasing concentrations of regulatory factors of the DDC enzyme such as the inhibitor Carbidopa and the neurotransmitter dopamine.Both the cytotoxicity and the protein expression pattern of the DDC molecule were studied. H2O2 was added as an oxidizing agent along with a DDC modulator to each cell line in order to investigate the cytotoxicity and protein expression when both agents coexist.The aim of this research work is to correlate all of the aforementioned data towards elucidating the role of DDC in the development of oxidative stress."]},{"key":"dc:title","label":"Title","values":["Μελέτη της έκφρασης και ρύθμισης της L-Dopa Αποκαρβοξυλάσης σε Bιοχημικούς μηχανισμούς Νευροεκφυλισμού"]}]}],"canonical_facts":{"dc:creator":["ΔΗΜΗΤΡΙΟΥ ΑΦΡΟΔΙΤΗ","DIMITRIOU AFRODITI"],"dc:date":["2026"],"dc:description":["Η παρούσα ερευνητική εργασία εκπονήθηκε στην Ερευνητική Μονάδα Ι του Τομέα Βιοχημείας και Μοριακής Βιολογίας του Τμήματος Βιολογίας, υπό την επίβλεψη της αναπληρώτριας καθηγήτριας Δρ. Διδώ Βασιλακοπούλου και του μέλους ΕΔΙΠ, Δρ. Νικόλαου Αρβανίτη. Εντάσσεται στα πλαίσια του μαθήματος «Διπλωματική Εργασία» του προγράμματος μεταπτυχιακών σπουδών «Κλινική Βιοχημεία – Μοριακή Διαγνωστική » του Τμήματος Βιολογίας του Εθνικού και Καποδιστριακού Πανεπιστημίου Αθηνών. Η ερευνητική μας ομάδα μέχρι τώρα έχει δείξει με τη μελέτη του μορίου της L-DOPA αποκαρβοξυλάσης ότι συμμετέχει τόσο στον αποπτωτικό θάνατο όσο και σε διεργασίες κυτταροτοξικότητας . Πρόσφατα δεδομένα της ερευνητικής μας ομάδας, έδειξαν τη σχέση της έκφρασης της L-DOPA αποκαρβοξυλάσης με την οξειδωτική καταπόνηση. Ακόμη και σε υψηλές ποσότητες Η2Ο2 τα αποτελέσματά μας με qPCR επέδειξαν αύξηση και στα επίπεδα έκφρασης του mRNA της DDC (Lotsios et al. 2023). Για την επίτευξη αυτού του στόχου επιλέχθηκαν δύο κυτταρικές σειρές, οι CHO και CHO-DDC. Τα κύτταρα CHO αποτελούν μοντέλα έρευνας για τη δράση των κατεχολαμινών, καθώς δεν εκφράζουν τις πρωτεΐνες-μεταφορείς τους (Costello et al. 2012; Percy et al. 1999). Η κυτταρική σειρά CHO-DDC δημιουργήθηκε στο εργαστήριο της κυρίας Βασιλακοπούλου, όπου κύτταρα CHO επιμολύνθηκαν με το cDNA της ανθρώπινης L-DOPA αποκαρβοξυλάσης πλήρους μήκους. Η DDC έχει πολυάριθμες ισομορφές και καταφέραμε να απομονώσουμε την L-DOPA αποκαρβοξυλάση πλήρους μήκους με την οποία πραγματοποιήθηκε επιμόλυνση στην κυτταρική σειρά CHO. Προς αυτή την κατεύθυνση, ο ερευνητικός στόχος ήταν να μελετήσουμε το φαινόμενο της συσχέτισης της έκφρασης της DDC με την οξειδωτική καταπόνηση ως σύστημα το οποίο έχει αναπτυχθεί στο εργαστήριο μας. Πρώτο βήμα της πειραματικής πορείας αποτέλεσε η εξακρίβωση της συμμετοχής αυξανόμενων συγκεντρώσεων H2O2 στην επαγωγή οξειδωτικού στρες στις επιλεγμένες κυτταρικές σειρές. Πραγματοποιήθηκαν πειράματα ποσοτικού προσδιορισμού κυτταροτοξικότητας σε κυτταρικές καλλιέργειες που είχαν αναπτυχθεί για συγκεκριμένο χρονικό διάστημα παρουσία αυξανόμενων συγκεντρώσεων H2O2, με απώτερο σκοπό τον προσδιορισμό των διαφορών στις τιμές κυτταρικού θανάτου συναρτήσει της αύξησης της συγκέντρωσης του οξειδωτικού παράγοντα. Αφού επιβεβαιώθηκε η σχέση του H2O2 στην επαγωγή οξειδωτικών συνθηκών, μελετήθηκε το πρότυπο πρωτεϊνικής έκφρασης του μορίου της DDC, κάτω από αυτές τις συνθήκες Ο προσδιορισμός πραγματοποιήθηκε μέσω ανοσοστύπωσης κατά Western. Σκοπός της πειραματικής πορείας ήταν ο εντοπισμός τυχών μεταβολών στην ποσοτική έκφραση της πρωτεΐνης καθώς και στο πρότυπο αποικοδόμησής της. Εκτός από το H2O2 οι δυο παραπάνω κυτταρικές σειρές εκτέθηκαν σε αυξανόμενες συγκεντρώσεις ρυθμιστικών παραγόντων του ενζύμου της DDC όπως ο αναστολέας Carbidopa και ο νευροδιαβιβαστής ντοπαμίνη . Μελετήθηκε τόσο η κυτταροτοξικότητα όσο και το πρότυπο πρωτεϊνικής έκφρασης του μορίου της DDC. Ακολούθησε προσθήκη H2O2 ως οξειδωτικό παράγοντα μαζί με ρυθμιστικό παράγοντα της DDC σε κάθε κυτταρική σειρά ώστε να διερευνηθεί η κυτταροτοξικότητα και η πρωτεϊνική έκφραση όταν συνυπάρχουν και οι δυο παράγοντες. Σκοπός της παρούσας ερευνητικής εργασίας είναι η συσχέτιση όλων των προαναφερθέντων δεδομένων προς τη διαλεύκανση του ρόλου της DDC στην ανάπτυξη του οξειδωτικού στρες .","This research work was carried out in Research Unit I of the Biochemistry and Molecular Biology Sector of the Department of Biology, under the supervision of Associate Professor Dr. Dido Vasilakopoulou and EDIP member Dr. Nikolaos Arvanitis.t is part of the "Diploma Thesis" course of the postgraduate study program "Clinical Biochemistry - Molecular Diagnostics" of the Department of Biology of the National and Kapodistrian University of Athens.Our research group has so far shown through the study of the L-DOPA decarboxylase molecule that it participates in both apoptotic death and cytotoxicity processes.Recent data from our research group have shown the relationship between L-DOPA decarboxylase expression and oxidative stress. Even at high amounts of H2O2, our qPCR results also showed an increase in DDC mRNA expression levels To achieve this goal, two cell lines were selected, CHO and CHO-DDC. CHO cells are models for research on the action of catecholamines, as they do not express their transporter proteins.The CHO-DDC cell line was created in Ms. Vasilakopoulou's laboratory, where CHO cells were transfected with the full-length human L-DOPA decarboxylase cDNA.DDC has numerous isoforms and we were able to isolate the full-length L-DOPA decarboxylase with which we transfected the CHO cell line.In this direction, the research goal was to study the phenomenon of the correlation of DDC expression with oxidative stress as a system that has been developed in our laboratory.he first step of the experimental process was to verify the participation of increasing concentrations of H2O2 in the induction of oxidative stress in the selected cell lines.Quantitative cytotoxicity assay experiments were performed on cell cultures that had been grown for a specific period of time in the presence of increasing concentrations of H2O2, with the ultimate aim of determining the differences in cell death rates as a function of the increasing concentration of the oxidizing agent.After confirming the role of H2O2 in the induction of oxidative conditions, the protein expression pattern of the DDC molecule was studied under these conditions.The determination was performed by Western immunoblotting. The aim of the experimental procedure was to identify any changes in the quantitative expression of the protein as well as in its degradation pattern.In addition to H2O2, the two above cell lines were exposed to increasing concentrations of regulatory factors of the DDC enzyme such as the inhibitor Carbidopa and the neurotransmitter dopamine.Both the cytotoxicity and the protein expression pattern of the DDC molecule were studied. H2O2 was added as an oxidizing agent along with a DDC modulator to each cell line in order to investigate the cytotoxicity and protein expression when both agents coexist.The aim of this research work is to correlate all of the aforementioned data towards elucidating the role of DDC in the development of oxidative stress."],"dc:identifier":["uoadl:5375233","https://pergamos.lib.uoa.gr/uoa/dl/object/5375233"],"dc:language":["Ελληνικά","Greek"],"dc:subject":["Θετικές Επιστήμες","Science"],"dc:title":["Μελέτη της έκφρασης και ρύθμισης της L-Dopa Αποκαρβοξυλάσης σε Bιοχημικούς μηχανισμούς Νευροεκφυλισμού"],"dc:type":["born_digital_postgraduate_thesis","Διπλωματική Εργασία","Postgraduate Thesis"]},"updated_at":"2026-07-24T01:02:21Z"}