{"id":{"repo_id":"ajou","oai_identifier":"oai:repository.ajou.ac.kr:201003/10857"},"canonical_url":"https://search.dev.ndltd.org/etd/ajou/oai:repository.ajou.ac.kr:201003/10857","repository":{"repo_id":"ajou","name":"Ajou University","base_url":"http://repository.ajou.ac.kr/oai/request"},"display":{"title":"A functional role of chromatin remodeling factor, Rsf-1 in the DNA damage signaling pathway","abstract":"As a member of imitation switch (ISWI) family in ATP-dependent chromatin remodeling factors, RSF complex consists of SNF2h ATPase and Rsf-1. Although it has been reported that SNF2h ATPase is recruited to DNA damage sites (DSBs) in poly(ADP-ribosyl) polymerase 1 (PARP1)-dependent manner in DNA damage response (DDR), the function of Rsf-1 is still elusive. Here we show that Rsf-1 is recruited to DSBs confirmed by various cellular analyses (immunofluorescent microscope, micro-irradiation and stably integrated reporter system at a single DNA double-strand break). Rsf-1 rapidly accumulated at the DSB sites. Signal of γ H2AX is gradually reduced at 10 minutes after micro-irradiation whereas signals of Rsf-1 and SNF2h are still retained over 30 minutes after DNA damage. Moreover, depletion of Rsf-1 attenuates the recruitment of SNF2h and γ-H2AX. In addition, Rsf-1 accumulation at DNA damage sites requires PARP1 activity through interacting with PHD domain. Finally, we demonstrate that depletion of Rsf-1 diminishes DNA damage checkpoint signals and repair. Thus, these results reveal a new function of chromatin remodeler Rsf-1 in coordinating DNA signaling and repair.","abstract_html":"As a member of imitation switch (ISWI) family in ATP-dependent chromatin remodeling factors, RSF complex consists of SNF2h ATPase and Rsf-1. Although it has been reported that SNF2h ATPase is recruited to DNA damage sites (DSBs) in poly(ADP-ribosyl) polymerase 1 (PARP1)-dependent manner in DNA damage response (DDR), the function of Rsf-1 is still elusive. Here we show that Rsf-1 is recruited to DSBs confirmed by various cellular analyses (immunofluorescent microscope, micro-irradiation and stably integrated reporter system at a single DNA double-strand break). Rsf-1 rapidly accumulated at the DSB sites. Signal of γ H2AX is gradually reduced at 10 minutes after micro-irradiation whereas signals of Rsf-1 and SNF2h are still retained over 30 minutes after DNA damage. Moreover, depletion of Rsf-1 attenuates the recruitment of SNF2h and γ-H2AX. In addition, Rsf-1 accumulation at DNA damage sites requires PARP1 activity through interacting with PHD domain. Finally, we demonstrate that depletion of Rsf-1 diminishes DNA damage checkpoint signals and repair. 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Thus, these results reveal a new function of chromatin remodeler Rsf-1 in coordinating DNA signaling and repair.","RSF 복합체는 뉴클레오솜 이동에 관여하는 크로마틴 리모델링 인자로서 ATPase 효소 기능을 가지고 있는 SNF2h 와 Rsf-1 으로 구성되어 있다. 크로마틴 리모델링 인자들은 DNA 상에서 뉴클레오솜을 이동시키거나 뉴클레오솜을 구성하는 히스톤을 교체함으로써 DNA 복제과정이나 RNA 합성과정에 영향을 미친다는 것이 알려져 있다. 최근에 크로마틴 리모델링 인자들이 DNA 손상 시 신호 체계나 손상 복구에 관여한다는 것이 보고되기 시작하고 있다. 본 연구에서는 Rsf-1 이 DNA 손상 신호에 관여하는 지 그리고 그 작용기전에 대해 연구하고자 하였다. Rsf-1 이 DNA 손상에 관여하는지를 알아보기 위한 방법으로 우선 DNA 손상부위로 이동하는 지를 조사하였다. Laser microirradiation 방법을 사용하여 DNA 에 손상을 준 부위에 Rsf-1 이 이동하여 축적되는 것을 관찰하였다. 또한, FokI system 을 이용하여 살아있는 세포의 염색체 특정부위에 이중나선절단을 유도하였을 때에도 Rsf-1 이 DNA 손상부위에 축적되었다. Rsf-1 이 DNA 손상부위에 축적되는 것은 결합체인 SNF2h 비의존적으로 일어나며, Rsf-1 의 PHD (plant homeodomain)도메인이 중요하다는 것을 확인하였다. 또한 DNA 손상신호의 초기 마커인 γ-H2AX 보다 빨리 DNA 손상부위로 이동하고, Rsf-1 의 발현이 저하된 경우에는 γ-H2AX 의 축적이 저하되는 것으로 보아 DNA 손상시 초기에 작용할 것으로 예상된다. 흥미롭게도 Rsf-1 이 빠른 시기에 축적이 되는 것은 PARP1 억제제를 통하여 PARP1 활성에 의존하여 이루어진다는 것을 관찰하였다. 따라서 본 연구는 Rsf-1 이 DNA 손상 신호 체계에 관여하며 PARP1 활성에 의해 DNA 손상 부위로 모이게 되고 DNA 손상 신호를 조절한다는 것을 밝히고 있다.","국문요약 ⅰ 차례 ⅲ 그림차례 ⅳ Ⅰ. 서론 1 Ⅱ. 재료 및 방법(혹은 연구대상 및 방법) 5 A. Cell culture, reagent and treatment 5 B. Plasmids and RNA interference 5 C. Laser micro-irradiation 6 D. Immunofluorescence microscopy 6 E. Antibodies 7 F. FokI assay 7 G. Survival assay 7 Ⅲ. 결과 9 A. Rsf-1 is accumulated to the regions of DNA damage and remained 9 B. Rsf-1 is recruited to the DNA damage sites 10 C. Rsf-1 contributes to SNF2h recruitment to DNA damage sites 11 D. Assembly of γ-H2AX at the DSB-flanking chromatin is regulated by Rsf-1 12 E. Rsf-1 accumulation at the DNA damage sites requires PARP1 activity 12 F. PHD domain of Rsf-1 is required for the DNA damage response 13 G. Depletion of Rsf-1 diminishes cell survival and DNA damage checkpoint signals 14 Ⅳ. 고찰 26 Ⅴ. 결론 31 참고문헌 32 ABSTRACT 38","Master"]},{"key":"dc:title","label":"Title","values":["A functional role of chromatin remodeling factor, Rsf-1 in the DNA damage signaling pathway","DNA 손상 신호 체계에서 크로마틴 리모델링 인자인 Rsf-1의 역할"]}]}],"canonical_facts":{"dc:contributor":["조, 혜성","대학원 의생명과학과","201125007","조, 수진"],"dc:creator":["조, 수진"],"dc:date":["2014-11-10T03:58:53Z","2014"],"dc:description":["As a member of imitation switch (ISWI) family in ATP-dependent chromatin remodeling factors, RSF complex consists of SNF2h ATPase and Rsf-1. Although it has been reported that SNF2h ATPase is recruited to DNA damage sites (DSBs) in poly(ADP-ribosyl) polymerase 1 (PARP1)-dependent manner in DNA damage response (DDR), the function of Rsf-1 is still elusive. 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Thus, these results reveal a new function of chromatin remodeler Rsf-1 in coordinating DNA signaling and repair.","RSF 복합체는 뉴클레오솜 이동에 관여하는 크로마틴 리모델링 인자로서 ATPase 효소 기능을 가지고 있는 SNF2h 와 Rsf-1 으로 구성되어 있다. 크로마틴 리모델링 인자들은 DNA 상에서 뉴클레오솜을 이동시키거나 뉴클레오솜을 구성하는 히스톤을 교체함으로써 DNA 복제과정이나 RNA 합성과정에 영향을 미친다는 것이 알려져 있다. 최근에 크로마틴 리모델링 인자들이 DNA 손상 시 신호 체계나 손상 복구에 관여한다는 것이 보고되기 시작하고 있다. 본 연구에서는 Rsf-1 이 DNA 손상 신호에 관여하는 지 그리고 그 작용기전에 대해 연구하고자 하였다. Rsf-1 이 DNA 손상에 관여하는지를 알아보기 위한 방법으로 우선 DNA 손상부위로 이동하는 지를 조사하였다. Laser microirradiation 방법을 사용하여 DNA 에 손상을 준 부위에 Rsf-1 이 이동하여 축적되는 것을 관찰하였다. 또한, FokI system 을 이용하여 살아있는 세포의 염색체 특정부위에 이중나선절단을 유도하였을 때에도 Rsf-1 이 DNA 손상부위에 축적되었다. Rsf-1 이 DNA 손상부위에 축적되는 것은 결합체인 SNF2h 비의존적으로 일어나며, Rsf-1 의 PHD (plant homeodomain)도메인이 중요하다는 것을 확인하였다. 또한 DNA 손상신호의 초기 마커인 γ-H2AX 보다 빨리 DNA 손상부위로 이동하고, Rsf-1 의 발현이 저하된 경우에는 γ-H2AX 의 축적이 저하되는 것으로 보아 DNA 손상시 초기에 작용할 것으로 예상된다. 흥미롭게도 Rsf-1 이 빠른 시기에 축적이 되는 것은 PARP1 억제제를 통하여 PARP1 활성에 의존하여 이루어진다는 것을 관찰하였다. 따라서 본 연구는 Rsf-1 이 DNA 손상 신호 체계에 관여하며 PARP1 활성에 의해 DNA 손상 부위로 모이게 되고 DNA 손상 신호를 조절한다는 것을 밝히고 있다.","국문요약 ⅰ 차례 ⅲ 그림차례 ⅳ Ⅰ. 서론 1 Ⅱ. 재료 및 방법(혹은 연구대상 및 방법) 5 A. Cell culture, reagent and treatment 5 B. Plasmids and RNA interference 5 C. Laser micro-irradiation 6 D. Immunofluorescence microscopy 6 E. Antibodies 7 F. FokI assay 7 G. Survival assay 7 Ⅲ. 결과 9 A. Rsf-1 is accumulated to the regions of DNA damage and remained 9 B. Rsf-1 is recruited to the DNA damage sites 10 C. Rsf-1 contributes to SNF2h recruitment to DNA damage sites 11 D. Assembly of γ-H2AX at the DSB-flanking chromatin is regulated by Rsf-1 12 E. Rsf-1 accumulation at the DNA damage sites requires PARP1 activity 12 F. 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