Universität Tübingen
Selektive Aktivierung von TNF-Rezeptor 1 am Tumor mittels bispezifischer Antikörper
Abstract
Tumor Nekrose Faktor (TNF) ist ein hoch potentes Zytokin mit beachtlicher Anti-Tumor Aktivität. Da eine systemische Applikation bisher durch die starken Nebenwirkungen verhindert wird, wurden viele Versuche unternommen, die Aktivierung des TNF-Rezeptor 1 (TNFR1) zielgerichtet zu vermitteln, um gesundes Gewebe vor den TNF vermittelten Effekten zu schützen. Dieses Ziel wurde jedoch bisher nicht hinreichend erreicht. Die vorliegende Arbeit beschäftigt sich mit der Generierung eines bispezifischen EpCAMxTNFR1-F(ab')2-Konstruktes. Fab'-Fragmente eines agonistischen Antikörpers gegen den murinen TNFR1 wurden chemisch mit einem anti-EpCAM-Fab’-Fragmenten hybridisiert. Wenn diese bispezifischen Konstrukte an EpCAM als Tumorantigen auf B16-Melanomzellen binden zeigen diese bereits bei 1ng/ml starke agonistische Aktivität, welche sowohl über eine Aktivierung von Kaspase 3 und 7 als auch über die Lyse von TNF sensitiven WEHI-164s Zellen nachgewiesen wurde. In Abwesenheit von EpCAM auf den B16 Zellen wurde erwartungsgemäß erst bei unphysiologisch hohen Konzentrationen (1000ng/ml) eine schwache Zellyse vermittelt. Daraufhin untersuchten wir die Aktivität des Konstruktes in einem B16 Melanom Mausmodell mit syngenen, immunkompetenten Mäusen. Hierfür wurden C57Bl/6 Mäusen jeweils 2.500 EpCAM transfizierte B16 Melanom Zellen i.p. injiziert und die Tiere nachfolgend mit 6 x 20µg des bispezifischen Konstruktes behandelt. Während alle sechs behandelten Mäuse überlebten, starben in der Kontroll-Gruppe fünf von sechs Mäusen innerhalb von 10 Wochen. In der behandelten Gruppe wurden keine signifikanten Nebenwirkungen beobachtet. Diese Ergebnisse demonstrieren, dass die Aktivität des EpCAMxTNFR1-F(ab')2-Konstruktes strikt von der Anwesenheit des Zielantigens EpCAM auf Tumorzellen abhängig ist und das Konstrukt folglich signifikante lokal begrenzte Anti-Tumor Effekte vermittelt. Damit ist die Basis für eine weitere tierexperimentelle Erprobung der bispezifischen F(ab')2-Fragmente als Grundlage für eine experimentelle klinische Erprobung derartiger Reagenzien an Patienten mit malignen Erkrankungen geschaffen.
Author and committee
dc:creator, dc:contributor.*- Author
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- Krusch, Matthias
Identifiers
dc:identifier.*- Identifier
- hdl:10900/44746